分光光度計(jì)是利用物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收的特性,，以較純的單色光作為入射光,，測(cè)定物質(zhì)對(duì)光的吸收，從而對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的儀器,。在使用過程中常常會(huì)出現(xiàn)測(cè)量誤差,，這些誤差又是如何產(chǎn)生的呢？

1.1復(fù)色光對(duì)比耳定律的偏離

比耳定律成立的前提條件是人射光是單色光,，但是精度再高的儀器,，即使是雙單色器的分光光度計(jì)，也只能獲得近乎單色的光,，無法獲得純單色光,，它仍然含有狹窄光通帶，具有復(fù)色光的性質(zhì),。而復(fù)色光會(huì)導(dǎo)致比耳定律的正或負(fù)偏離,。

固定狹縫的紫外分光光度計(jì)光譜帶寬一般為1nm或2nm，可調(diào)狹縫的可以做到0.Inm,；可見分光光度計(jì)帶寬6nm,、snm，甚至十幾納米,。

光譜帶寬應(yīng)該是越小越好,，但是隨著光譜分辨率的提高，儀器的靈敏度降低,，所以選擇儀器時(shí)要綜合考慮各種條件的影響,。當(dāng)溶液濃度較小且單色光較純時(shí)，可近似認(rèn)為符合比耳定律,。

1.2雜散光的影響

雜散光是指進(jìn)人檢測(cè)器的處于待測(cè)波長(zhǎng)光譜帶寬范圍外的其他波長(zhǎng)組分,，它是光譜測(cè)量中誤差的主要來源。

產(chǎn)生原因有:分光光度計(jì)的色散元件,、反射鏡,、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等,。在分光光度計(jì)工作波段邊緣波長(zhǎng)處，由于單色器透光率,、光源輻射強(qiáng)度,、檢測(cè)器靈敏度都較低，雜散光的影響更為顯著,。

雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴(yán)重的測(cè)量誤差,，實(shí)際工作中，在定量分析時(shí),，一般在吸收峰或其附近處測(cè)量樣品吸光度，如果在分析波長(zhǎng)處含有雜散光,，這時(shí)樣品的透光率較小,，而雜散光大部分透過，使測(cè)量吸光度低于真實(shí)吸光度,。

1.3儀器噪聲對(duì)測(cè)t的影響

儀器噪聲也是儀器的一個(gè)重要指標(biāo),，它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測(cè)量的分析信號(hào)中的不需要的信號(hào),，掃描100%T和0%T線,，可觀察到分光光度計(jì)的絕對(duì)噪聲水平，如果儀器噪聲較大,，會(huì)掩蓋較小的測(cè)量信號(hào),，一般用噪音的二倍來表示儀器的靈敏度。

1.4波長(zhǎng)和吸光度準(zhǔn)確度

樣品的每一個(gè)值都是在一定的波長(zhǎng)下測(cè)得的,，如果波長(zhǎng)誤差很大,，測(cè)出的值肯定不準(zhǔn)。吸光度準(zhǔn)確度也是用戶對(duì)儀器的直接要求,，更應(yīng)引起足夠的重視,。

國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定雙光束紫外可見分光光度計(jì)透射比準(zhǔn)確度為A等級(jí)士0.6%， B等級(jí)土1.0%,。

2測(cè)量條件的選擇

2.1參比溶液和溶荊的選擇

分光光度計(jì)的測(cè)量實(shí)際上是以通過參比池的光強(qiáng)度作為人射光強(qiáng)度來測(cè)定試樣的吸光度,，先調(diào)節(jié)儀器使透過參比池溶液的吸光度為零，然后讓同一束光通過樣品,，使得吸光度比較真實(shí)地反映待測(cè)物質(zhì)的濃度,，所以參比溶液的選擇非常重要。

如果僅有待測(cè)物質(zhì)與顯色劑的反應(yīng)產(chǎn)物有吸收,，可用純?nèi)軇┗蛘麴s水作參比溶液,。如果顯色劑有顏色，并在測(cè)定波長(zhǎng)下有吸收,，則用顯色劑溶液作參比溶液,，所加人顯色劑及其它試劑的量,，與試樣中的加入量應(yīng)一致。

如果樣品中其它組分本身的顏色對(duì)測(cè)定有干擾,，而所用顯色劑沒顏色,，則用不加顯色劑的樣品溶液作參比液。

正確選擇合適的溶劑,，對(duì)提高分析的準(zhǔn)確度起重要作用,。為減小溶劑中雜質(zhì)的影響，應(yīng)選擇高純度的溶劑,；溶劑應(yīng)不與待測(cè)物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng),；待測(cè)物在溶劑中要有一定的溶解度；在測(cè)定的波長(zhǎng)范圍內(nèi),，溶劑本身沒有吸收,，注意常用溶劑的最短可用波長(zhǎng)；當(dāng)用揮發(fā)性大的溶劑時(shí),，測(cè)量過程中吸收池應(yīng)加蓋,。

2.2測(cè)試波長(zhǎng)的選擇

當(dāng)用分光光度計(jì)對(duì)溶液進(jìn)行測(cè)定時(shí)，首先需要選擇合適的測(cè)量波長(zhǎng),。選擇的依據(jù)是該被測(cè)溶液的吸收曲線,。在一般情況下，我們總是選擇最大吸收波長(zhǎng)作為測(cè)量波長(zhǎng),，這樣可以提高靈敏度,。

而在有些情況下最大吸收峰很尖銳、吸收過大或附近有干擾存在,，就不能選最大吸收波長(zhǎng),，而必須在保證有一定靈敏度的情況下，選擇吸收曲線中的其它波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定(曲線較平坦處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)),，以消除干擾,。繪制吸收曲線是正確選擇波長(zhǎng)的有效手段和方法。

3,、分光光度計(jì)的檢驗(yàn)小妙招

波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的檢驗(yàn)

分光光度計(jì)在使用過程中,，由于機(jī)械振動(dòng)、溫度變化,、燈絲變形,、燈座松動(dòng)或更換燈泡等原因，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)刻度盤上的讀數(shù)與實(shí)際通過溶液的波長(zhǎng)不符合的現(xiàn)象,，因而導(dǎo)致儀器靈明度降低,，影響測(cè)定結(jié)果的精度，需要進(jìn)行檢驗(yàn),。

檢驗(yàn)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度簡(jiǎn)單的方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測(cè)量?jī)x器的吸收峰值, 如果測(cè)出的值與濾光片標(biāo)準(zhǔn)值之差超出規(guī)程規(guī)定, 則需要進(jìn)行波長(zhǎng)調(diào)節(jié),。

透射比正確度的檢驗(yàn)

用透射比標(biāo)準(zhǔn)值分別為10 %,、20 %、30 %左右的光譜中性濾光片,，可見光區(qū)分別在440,、546、635nm波長(zhǎng)處,，以空氣為參比,，分別測(cè)量各濾光片的透射比，紫外光區(qū)用重鉻酸鉀溶液分別在235,、257,、313、350nm波長(zhǎng)處,，以高氯酸溶液為參比,，測(cè)量其透射比。

穩(wěn)定度的檢驗(yàn)

在零點(diǎn)不受光的條件下,，用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點(diǎn)，觀察3分鐘讀取透射比的變化,，即為零點(diǎn)穩(wěn)定性,。在儀器測(cè)量范圍兩端向中間靠10nm處，調(diào)節(jié)零點(diǎn)后,，蓋上樣品室蓋(打開光門),，使光電管受光，調(diào)節(jié)透射比為95%（數(shù)顯儀器調(diào)至100%）察3分鐘讀取透射比的變化,，為光電流穩(wěn)定性,。

光的檢驗(yàn)

可見分光計(jì)棱鏡式儀器在420nm處，光柵式儀器在360nm處,，紫外分光計(jì)在220nm處分別用符合規(guī)定的截止濾光片,，以空氣為參比，測(cè)量其透射比值,，即為儀器在相應(yīng)波長(zhǎng)下的雜散輻射率,。