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分子熒光分光光度計的測試“技巧”分享
閱讀：2956 發(fā)布時間：2019-4-24
分子熒光分光光度計的熒光強度容易受外界因素的影響,，如樣品池、激發(fā)光源,、溫度,、溶液的pH值、溶劑性質(zhì),、其它溶質(zhì),、表面活性劑等都會造成熒光強度的變化。嚴格控制測試條件對熒光分析來說至關重要,。
1.樣品應盛在四面透光的石英比色皿（熒光池）中,，如果是揮發(fā)性樣品應使用帶塞的熒光池。
2.熒光分析時,，為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù),，一般需要開機預熱氙燈大約30min,。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈，預熱時間可以縮短到10min左右,。對某些易感光,、易分解的熒光物質(zhì)，盡量采用長波長,、低人射光強度及短時間光照,。
3.溫度變化可引起熒光強度的改變。通常降低溫度,，有利于提高熒光量子產(chǎn)率,，熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異,，大部分熒光物質(zhì)的熒光強度受溫度影響不大,，測試溫度變化不超過±3℃，對測試結(jié)果幾乎無影響,。
4.當熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時,，溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中,，分子和離子的電離平衡會發(fā)生改變,，而熒光物質(zhì)的熒光強度會因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。
5.分子結(jié)構(gòu)中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中,，熒光效率顯著增強,。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強度。
6.瑞利散射和拉曼散射是溶劑的兩種散射光,，應注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當做熒光光譜,。瑞利散射光波長與激發(fā)光波長相同，拉曼散射與激發(fā)光波長不同,，而熒光物質(zhì)的熒光波長與激發(fā)光波長無關,，因此可以通過選擇適當?shù)募ぐl(fā)波長將拉曼散射光與熒光分開。在測試時選擇合適的狹縫寬度,，或者空白扣除,，也可以對散射光的影響進行校正。
7.熒光物質(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導致熒光強度降低,，常見的熒光猝滅劑,，如鹵素離子、重金屬離子,、硝基化物質(zhì),、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現(xiàn)象,，因此,，在較嚴格的熒光實驗中必須除02,。
8.測試過程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看，以防對眼睛造成損傷,。
9.分子熒光分光光度計工作室內(nèi)應注意經(jīng)常通風,，避免產(chǎn)生的臭氧在室內(nèi)富集。