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組織細胞的破碎方法
閱讀：3607發(fā)布時間：2009-3-22
組織細胞的破碎方法很多，有機械方法,、物理方法,、化學方法和生物化學方法等。在破碎前,，材料常需要預處理，如動物材料要除去與實驗無關甚至有妨礙的結締組織,，脂肪組織和血污等,，植物種子需要除殼，微生物材料需將菌體和發(fā)酵液成分分開等,。
不同實驗規(guī)模,、不同實驗材料和實驗要求，使用的破碎方法和條件也不同,。一些堅韌組織,，如肌肉、植物的根莖等,，常需要強烈的攪拌或研磨作用,，才能把其組織細胞破壞。而比較柔軟的組織如肝,、腦等,，用普通的玻璃勻漿器即可達到*破壞細胞的目的。對同一實驗材料，由于實驗目的（要求）的不同,，采用的破碎方式也存在一定差異,，如提取中的核酸和提取其中的核苷酸，前者必須保持十分溫和的條件,，以保持分子的完整性,；后者可采用強烈手段。
1． 機械法
主要通過機械切力的作用使組織細胞破碎的方法,，常用的器械有組織搗碎機,、勻漿器、研缽和研磨,、壓榨器等,。
1）組織搗碎機 一般用于動物組織、植物肉質種子,、柔嫩的葉芽等,，轉速可高達10000rpm/M以上。由于旋轉刀片的機械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用,。
2）勻漿器 勻漿器的研缽磨球和玻璃管內壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離,，破碎細胞的程度比組織搗碎機高。制作勻漿器的材料,，除玻璃外,，還可以用硬質塑料、不銹鋼,、人造熒光樹脂等,。
3）研缽 多用于細菌或其他堅硬植物材料，研磨時常加入少量石英砂,，玻璃粉或其他研磨劑,，以提高研磨效果。
4）細菌磨 是一種改良了的研磨器,，比研缽具有更大的研磨面積,，而且低部有出口。操作時先把細菌和研磨粉調成糊狀,，每次加入一小勺,，研磨20-30秒即可將細菌細胞*磨碎。
2． 物理法
主要通過各種物理因素使組織細胞破碎的方法,。在生化制備中常用的方法有：
1）反復凍溶法 先將樣品深冷至-15---20度使之凍固,，再緩慢的融化，反復多次,，多用于動物性材料,。
2）急熱驟冷法 將材料投入沸水中，維持85-90分鐘，至水浴中急速冷卻,，此法可用于細菌及病毒材料,。
3）超聲波處理 頻率一般選在10KC至200KC，功率200-500瓦范圍,，處理時間有數分鐘至數十分鐘不等,，處理過程中注意冷卻。此法多用于微生物材料,。
3．化學及生物化學法
有自溶法,，酶解法和表面活性劑法等。
1）自溶法 在一定PH和適當的溫度下,，利用組織細胞內自身的酶系統(tǒng)將細胞破碎的方法,。此過程需較長時間，常用少量防腐劑如甲苯,、氯仿等防止細胞的污染,。
2）酶溶法 利用各種水解酶，如溶菌酶,、纖維素酶,、蝸牛酶、半纖維素酶,、脂酶等,，將細胞壁分解，使細胞內含物釋放出來,。有些細菌對溶菌酶不敏感,，加入少量巰基試劑或8摩爾尿素處理后，使之轉為對溶菌酶敏感而溶解,。
3）表面活性劑處理 如十二烷基硫酸鈉,、氯化十二烷基吡啶等。
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