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　　方法：

　　1、將DNA加熱（至90~95℃）變性,，將雙股的DNA加熱后轉(zhuǎn)為單股DNA以做為復(fù)制的模板,。

　　2、則是令Primers于一定的溫度下（冷卻至55~60℃）附著于模板DNA兩端,。最后在DNA聚合酶e.g.Taq-polymerase的作用下（加熱至70~75℃）進(jìn)行引物的延長Extensionofprimers及另一股的合成,。

　　標(biāo)準(zhǔn)PCR儀也叫做終點(diǎn)PCR儀，是指目的基因僅經(jīng)過預(yù)變性,、變性,、退火、延伸階段產(chǎn)生大量的核酸序列的PCR儀,，PE-Cetus公司推出的第一臺(tái)PCR自動(dòng)化熱循環(huán)儀屬于此種。

　　根據(jù)PCR退火溫度和擴(kuò)增條件（細(xì)胞內(nèi)/外）,，標(biāo)準(zhǔn)PCR又可以分為三類：普通PCR,、梯度PCR和原位PCR。

　　PCR是分子生物學(xué)研究極其重要的工具,，是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),，基本原理是在試管中模擬細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制，即人為創(chuàng)造核酸半保留復(fù)制條件,，使目的DNA在細(xì)胞外完成擴(kuò)增的過程,，它可被看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制。

　　擴(kuò)展資料

　　1,、普通PCR儀：一般把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀,，稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運(yùn)行,。主要是用作簡單的、對單一退火溫度的目的基因的擴(kuò)增,。主要應(yīng)用于科研,、教學(xué),、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn),、檢疫等,。

　　2、梯度PCR儀：普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴(kuò)增儀,。梯度PCR儀每個(gè)孔的溫度可以在范圍內(nèi)按照梯度設(shè)置,，一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)。由于被擴(kuò)增的DNA片段不同,，其最佳退火溫度也不同,，通過梯度設(shè)置。

　　可一次性篩選出最佳的退火溫度,。這樣既可節(jié)省試驗(yàn)時(shí)間，提高實(shí)驗(yàn)效率,，又能節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本,。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研,、教學(xué)機(jī)構(gòu),。

　　3、原位PCR儀：是將PCR技術(shù)的高效擴(kuò)增與原位雜交的細(xì)胞定位結(jié)合起來,，用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀,，從而在組織細(xì)胞原位檢測單拷貝或低拷貝的特定DNA或RNA序列。原位PCR技術(shù)的待檢標(biāo)本一般先經(jīng)化學(xué)固定,，以保持組織細(xì)胞的良好形態(tài)結(jié)構(gòu),。

　　細(xì)胞膜和核膜均具有一定的通透性,，當(dāng)進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí),，各種成分，如引物,、DNA聚合酶、核苷酸等均可進(jìn)進(jìn)細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi),，以固定在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)的RNA或DNA為模板,，于原位進(jìn)行擴(kuò)增。

　　原位PCR儀對于在分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有著重要意義,。