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摘要：采用凱氏法測(cè)辣木葉提取物中的蛋白質(zhì)含量是國標(biāo)推薦方法,。

關(guān)鍵詞：沛歐全自動(dòng)定氮儀、消化爐,、辣木葉蛋白質(zhì)含量

引言：辣木葉為辣木科辣木屬植物的樹葉,，可食用，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值非常豐富,，含有大量的蛋白質(zhì),、氨基酸、纖維素及礦物質(zhì),，具有降血糖,、降脂、降壓,、抗腫瘤,、抗氧化、通便,、改善睡眠等功效,，長(zhǎng)期食用可增強(qiáng)人體**功能，延緩衰老,、預(yù)防**,，其蛋白質(zhì)的含量直接影響辣木葉的品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)功效，因此對(duì)辣木葉提取物蛋白質(zhì)含量的測(cè)定具有重要的意義,。為此我們使用沛歐全自動(dòng)定氮儀SKD-1000（采用通用的顏色法判斷,、具有多項(xiàng)磚利技術(shù)）紅外石英消化爐SKD-20S2對(duì)辣木葉提取物進(jìn)行蛋白質(zhì)檢測(cè)。

前言:按GB2009.5食品安國內(nèi)家標(biāo)準(zhǔn) 《食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》**法要求測(cè)試,。

參考文獻(xiàn)：GB2009.5

一,、原理

辣木葉提取物樣品在濃硫酸和硫酸銅、硫酸鉀高溫下,，把有機(jī)的細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞,，把氮元素氧化成硫酸銨，（為了使得樣品消化時(shí)不產(chǎn)生掛壁,，必須采用樣品孔間溫差小和帶程序升溫功能的消化爐,，否則會(huì)產(chǎn)生掛壁現(xiàn)象,，導(dǎo)致消化失敗）消化完成后,，需要將樣品冷卻到40℃左右,，再把消化管放入定氮儀上。消化管內(nèi)自動(dòng)添加稀釋液,、堿,，反應(yīng)杯內(nèi)自動(dòng)添加硼酸和顯色劑。對(duì)消化管內(nèi)樣品加熱逸出氨氣和水蒸氣混合液,，冷卻流到反應(yīng)杯內(nèi),，同時(shí)用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸進(jìn)行滴定，直到蒸餾結(jié)束和滴定到終點(diǎn),。計(jì)量消耗標(biāo)準(zhǔn)鹽酸的體積即可計(jì)算辣木葉提取物中蛋白質(zhì)含量,。

二、儀器和設(shè)備

1. 全自動(dòng)定氮儀SKD-1000（上海沛歐分析儀器有限公司）

2. 消化爐SKD-20S2（上海沛歐分析儀器有限公司）

3. 萬分之**平

4. 滴管移液器

5.烘箱

三,、試劑,、樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

1. 標(biāo)準(zhǔn)鹽酸濃度：0.1114 mol/L

2. 40%的氫氧化鈉

3.2%的硼酸+甲基紅和嗅甲酚綠混合的顯色劑（1:3.5）

4.催化劑（硫酸銅:硫酸鉀為1:10的混合物）

5.蒸餾水

6.樣品：辣木葉提取物20201001

7.硫酸銨 

四、操作條件和程序

1. 樣品制備

用分析天平依次稱取2個(gè)空白,，稱樣量為：①0.4082 g硫酸銅,、3.6037 g硫酸鉀；②0.4045 g硫酸銅,、3.6049 g硫酸鉀,，5個(gè)辣木葉提取物待測(cè)樣品，稱樣量為：①0.4061 g硫酸銅,、3.6010 g硫酸鉀,、0.4058 g辣木葉提取物；②0.4048 g硫酸銅,、3.6035 g硫酸鉀,、0.4037 g辣木葉提取物,；③0.4097 g硫酸銅,、3.6060 g硫酸鉀、0.4032 g辣木葉提取物,；④0.4069 g硫酸銅,、3.6018 g硫酸鉀、0.4096 g辣木葉提取物,；⑤0.4047 g硫酸銅,、3.6009 g硫酸鉀、0.4011 g辣木葉提取物,，將稱量好的空白與樣品分別置于標(biāo)號(hào)的消化管中,，依次向每個(gè)消化管中加入10 mL硫酸,。

2. 樣品消化及消化爐參數(shù)設(shè)置

將制備好的空白及樣品按序號(hào)放入消化爐，蓋上排廢氣裝置,，打開抽氣泵上水開關(guān)（前三個(gè)階段水流要大,，使釋放出大量廢氣能及時(shí)排除，第四階段水流開小以避免酸霧排出）,，然后進(jìn)行消化爐溫度-時(shí)間曲線參數(shù)設(shè)置：135度（20分鐘）--190度（25分鐘）---350度（5分鐘）----400度（70分鐘）,，消化爐根據(jù)時(shí)間-溫度曲線自動(dòng)升溫和保溫，直到消化結(jié)束,。把消化架取下放在冷卻架上,，冷卻到40℃左右。

3.凱氏定氮儀儀器回收率測(cè)定

用分析天平精密稱量已烘干的硫酸銨（125 ℃烘箱烘2h）2份,，稱樣量為：0.1041 g,、0.115 g，分別置于標(biāo)號(hào)的消化管中,，然后在凱氏定氮儀儀器上進(jìn)行測(cè)定參數(shù)設(shè)置進(jìn)行測(cè)定,，參數(shù)設(shè)置為：堿10 mL、稀釋液20 mL,、樣品0.1041g和0.115g,、滴定酸為鹽酸、標(biāo)準(zhǔn)酸濃度為0.1114 mol/L,、定時(shí)6 min,、系數(shù)1、名稱硫酸銨1和硫酸銨2,，參數(shù)設(shè)置完畢后,，點(diǎn)擊屏幕上的測(cè)試程序中的調(diào)取，*后點(diǎn)擊樣品測(cè)試選項(xiàng)即可進(jìn)行測(cè)試,，測(cè)試完畢后查看兩次平行測(cè)定的含氮和消耗酸的數(shù)據(jù)是否正常,，依次來判定該儀器運(yùn)行是否正常。

4.凱氏定氮儀參數(shù)設(shè)置

  打開凱氏定氮儀顯示屏,，點(diǎn)擊參數(shù)設(shè)置,，依次輸入堿45 mL、稀釋液40mL,、樣品克數(shù),、標(biāo)準(zhǔn)酸濃度0.11414 mol/L、定時(shí)6 min,、樣品名稱,、系數(shù)6.25，總共測(cè)5個(gè)樣品，因此要依次設(shè)置5次,，一并保存,，即可自動(dòng)測(cè)定。

5.樣品蛋白質(zhì)測(cè)定

  參數(shù)設(shè)置完后,，便可將對(duì)應(yīng)標(biāo)號(hào)的空白和樣品的消化管接到儀器對(duì)應(yīng)位置,，先測(cè)空白，再依次測(cè)樣,，測(cè)定數(shù)據(jù)依次自動(dòng)保存在儀器硬件盤中,，測(cè)完查詢記錄即可。

6.計(jì)算公式

蛋白質(zhì)含量計(jì)算公式x%=6.38×1.401(v-v0)c/m

氮含量計(jì)算公式y%=1.401(v-v0)c/m

x%---------蛋白質(zhì)含量

y%---------氮含量

v--------消耗標(biāo)準(zhǔn)酸體積（ml)

V0------空白消化標(biāo)準(zhǔn)酸體積(ml)

C--------標(biāo)準(zhǔn)酸濃度（mol/L)

m--------樣品質(zhì)量(ｇ)

質(zhì)控品采用烘干的分析純（99%）硫酸氨,，硫酸銨理論含氮量21.21%

結(jié)果分析:本次測(cè)試數(shù)據(jù)符合要求,，數(shù)據(jù)可靠。

附：5009.5-2010 《食品安國內(nèi)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》

注意事項(xiàng)：

辣木葉提取物在取樣時(shí)注意均勻性,，在消化樣品時(shí),，尤其是含糖、油脂的樣品容易起泡產(chǎn)生樣品掛壁,，這時(shí)消化爐要有程序升溫功能,，孔間溫差要小，避免樣品溫差所產(chǎn)生的升溫不協(xié)調(diào)而使樣品掛壁,。

定氮儀要有足夠大的蒸餾功率,，以便盡可能蒸餾出氨氣，提升回收率,。如果全自動(dòng)定氮儀則采用顏色法終點(diǎn)判斷的方法,，保障數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和儀器的線性度。

儀器安裝現(xiàn)場(chǎng)圖