液相色譜柱的一些要求
zui常用的色譜柱填充劑為化學(xué)鍵合硅膠,。反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑,以十八烷基硅烷鍵合硅膠zui為常用,,辛基硅烷鍵合硅膠和其他類型的硅烷鍵合硅膠(如氰基鍵合硅烷和氨基鍵合硅烷等)也有使用,。正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑,常用的填充劑有硅膠等,。離子交換色譜系統(tǒng)使用離子交換填充劑,;分子排阻色譜系統(tǒng)使用凝膠或高分子多孔微球等填充劑;對映異構(gòu)體的分離通常使用手性填充劑,。
填充劑的性能(如載體的形狀,、粒徑、孔徑,、表面積,、鍵合基團(tuán)的表面覆蓋度、含碳量和鍵合類型等)以及色譜柱的填充,,直接影響供試品的保留行為和分離效果,。孔徑在15nm(1nm=10Å)以下的填料適合于分析分子量小于2000 的化合物,,分子量大于2000 的化合物則應(yīng)選擇孔徑在30nm 以上的填料,。除另有規(guī)定外,分析柱的填充劑粒徑一般在3μm~10μm 之間,。粒徑更?。s2μm)的填充劑常用于填裝微徑柱(內(nèi)徑約2mm),使用微徑柱時(shí),,輸液泵的性能,、進(jìn)樣體積、檢測池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配,;如有必要,,色譜條件也需作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。當(dāng)對其測定結(jié)果產(chǎn)生爭議時(shí),,應(yīng)以品種正文規(guī)定的色譜條件的測定結(jié)果為準(zhǔn),。 存放前除去雜質(zhì)和鹽,采用合適的存放溶劑,,避免色譜柱床的干枯,,避免機(jī)械振動(dòng),防止細(xì)菌生長,,注意存放的溫度,。
液相色譜柱的裝柱方法
1. 色譜柱應(yīng)該是可以直接接在勻漿罐上的,如果不能,則需要一個(gè)轉(zhuǎn)換接頭,。這個(gè)轉(zhuǎn)換接頭的尺寸很重要,,既要能防止漏液,又要避免過硬或尺寸不合適而導(dǎo)致色譜柱接口螺紋的損壞,;
2. 具體裝柱過程一般來說是①先以合適的勻漿液(多為有機(jī)溶劑,,劉國詮老師的《色譜柱技術(shù)》一書中列的比較全,可供參考)將填料充分分散(可以借助攪拌,、超聲等方式),;②在填料勻漿的過程中,完成準(zhǔn)備工作,,即把色譜柱接在勻漿罐的下端(色譜柱不接勻漿罐的一段要接好篩板和柱頭,,確保擰緊但不能擰死以免損壞色譜柱),打開勻漿罐上端和氣泵之間的接頭以便灌入勻漿液,;③勻漿液罐好后,,接好勻漿罐上端接頭,開始加壓,;④選擇合適的壓力,,就可以把填料壓實(shí)了,;⑤穩(wěn)定在適當(dāng)?shù)膲毫ι蠅阂欢〞r(shí)間后,,卸掉壓力,卸下色譜柱,,把接勻漿罐這一段的填料抹平,,裝上篩板和柱頭即可使用。
3. 裝柱是個(gè)困難的過程,,需要耐心摸索壓力,、勻漿液體積等參數(shù),才能確保柱床均勻密實(shí),,達(dá)到*柱效和峰形,。如果裝的不好,則可能出現(xiàn)柱效不夠,,或拖尾等問題,。
液相色譜柱的裝柱方法一般情況下都是這樣操作的,特殊情況請廠家或者代理商,。
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