色譜柱開啟和安裝的推薦步驟:
使用新鮮潔凈的水與乙腈,。沖洗系統(tǒng),確保系統(tǒng)干凈,,不含任何緩沖鹽和污染物,。
取用色譜柱時避免磕碰掉落。
將色譜柱入口端連接到系統(tǒng)上,,柱出口端先不要連接,,色譜柱身上有箭頭標明正確流向。
在0.1 mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱,,然后在2分鐘內(nèi)將流速升至0.5 mL/min,。
當溶劑均勻的從柱出口端流出,停流速,,將色譜柱出口端接到系統(tǒng)檢測器上(這樣可以避免氣泡進入檢測系統(tǒng),,并且可快速達到基線平衡)。
重啟流速,,按照步驟4的方法逐漸提高流速,,至常規(guī)分析時所使用的流速。
參考柱效測試報告中的方法,,使用該流動相條件平衡色譜柱,,通常需要使用5-10倍柱體積的流動相,直至壓力與基線穩(wěn)定,。
測試柱效,。如果沒有柱效測試報告中的分析物,請聯(lián)系沃特世化學(xué)消耗品部門尋求支持,使用合適的濃度與進樣量,。柱效結(jié)果略低于柱效測試報告屬正常情況,。如結(jié)果明顯偏低、峰形拖尾,,提示色譜柱和/或所使用的液相系統(tǒng)處于非理想狀態(tài),,需要進行故障排查。
當使用2.1 mm內(nèi)徑色譜柱時,,建議優(yōu)化系統(tǒng)以減少譜帶展寬,,包括:使用檢測器微量流通池,減少進樣器loop環(huán)體積,,使用較小內(nèi)徑(如0.005''或0.12 mm)的系統(tǒng)管路,。并確保管路與色譜柱連接恰當、無死體積,。
當使用小顆粒填料(如2.5 um)短柱進行高效快速分離時,,需要考慮以下因素:
確保管路與色譜柱連接恰當、無死體積,,盡量優(yōu)化系統(tǒng)減少譜帶展寬,;
提高采樣頻率至10點/秒以上;
較小粒徑的色譜柱產(chǎn)生的柱壓較高,,而較小粒徑要達到優(yōu)色譜效率所需的線速度較高,,請根據(jù)所用LC系統(tǒng)的實際情況調(diào)節(jié)流速;
可使用較高的柱溫來補償小顆粒造成的壓力升高,,例如40°C,。使用雜化顆粒反相色譜柱時,可使用45°C或更高,。
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