液相色譜柱的使用方法:
液相色譜柱在使用前,,進(jìn)行柱的性能測試,,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考,。但要留意: 液相色譜柱柱性能可能由于所使用的樣品,、活動相、柱溫等條件的差異而有所不同,;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是*條件),,只有這樣,,測得的結(jié)果才有可比性。
1,、樣品的前處理:
a,、使用活動相溶解樣品。
b,、使用予處理柱除往樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì),。
c、使用0.45μm的過濾膜過濾除往微粒雜質(zhì),。
2,、活動相的配制:
液相色譜是樣品組分在柱填料與活動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求活動相具備以下的特點(diǎn):
a,、活動相對樣品具有一定的溶解能力,,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保存在柱中)。
b,、活動相具有一定惰性,,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外),。
c、活動相的黏度要盡量小,,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果,;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用進(jìn)步溫度的方法降低活動相的黏度),。
d,、活動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,,使用對紫外吸收較低的溶劑配制,。
e、活動相沸點(diǎn)不要太低,,否則輕易產(chǎn)生氣泡,,導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行。
f,、在活動相配制好后,,一定要進(jìn)行脫氣。除往溶解在活動相中的微量氣體既有利于檢測,,還可以防止活動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用,。
3、活動相流速的選擇:
因柱效是柱中活動相線性流速的函數(shù),,使用不同的流速可得到不同的柱效,。對于一根特定的色譜柱,要追求*柱效,,使用*流速,。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,,流速0.8ml/min為佳。
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