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技術(shù)文章

動(dòng)物組織各種固定液及優(yōu)缺點(diǎn)

點(diǎn)擊次數(shù):5155 發(fā)布時(shí)間:2017-5-10

動(dòng)物組織各種固定液及優(yōu)缺點(diǎn)

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優(yōu)缺點(diǎn)或備注

甲醛:從組織學(xué)的觀點(diǎn)來說,甲醛是一種良好的固定劑,它有很多的優(yōu)點(diǎn):1. 組織收縮較少,損傷少,保存固有物質(zhì)好.2. 固定均勻,穿透力強(qiáng).3. 能使組織硬化,增進(jìn)組織彈性,有利于切片.4. 能保存脂肪及脂類物質(zhì).5. 成本較低.

缺點(diǎn):1. 雜質(zhì)含量較多,如甲醇,可鈍化酶類,影響反應(yīng).2. 含有微量甲酸,導(dǎo)致固定液酸變,影響染色.3. 可產(chǎn)生福爾馬林色素,影響觀察.4. 不能固定尿酸和糖類物質(zhì).5. 容易揮發(fā),污染環(huán)境,可導(dǎo)致標(biāo)本干涸.6. 可長(zhǎng)期存在于固定過的組織上.有人做過實(shí)驗(yàn),組織用甲醛固定后在流水中沖洗5小時(shí)后,仍留有相當(dāng)多的甲醛與蛋白質(zhì)相結(jié)合,臨床活檢不用.因此要特別指出的是,在其后的各種技術(shù)操作中,要特別注意到甲醛的存在,必須要想辦法除去它,否則將會(huì)給各種染色造成影響,甚至導(dǎo)致失敗。

1

10%緩沖福爾馬林固定液

甲醛 100ml
蒸餾水 900ml
NaH2PO4 4g
Na2HPO4   6.5g

該固定液是當(dāng)今流行的固定液,因它對(duì)組織固定較好,損傷較少,因?qū)ζ浜蟮母鞣矫嫜芯慷驾^好,尤其是對(duì)免疫組化的染色,。

2

10%福爾馬林固定液

甲醛100 ml

自來水900ml

這是一種zui簡(jiǎn)單的固定液,,適合于邊遠(yuǎn)地區(qū)攜帶的固定液,但由于它的單一性,,因此,,只要有條件的單位都不要求使用這種固定液。

3

10%福爾馬林鹽固定液

甲醛 100ml
自來水 900ml
Nacl 9克

先將Nacl溶于水,,再加入甲醛,。這也是一種較為簡(jiǎn)單的固定液,但由于加入Nacl,,它是一種重金屬鹽物質(zhì),,加入了它可促進(jìn)和改善染色,增加染色的強(qiáng)度

4

Bouin氏固定液

苦味酸飽和水溶液 75ml
甲醛 2 ml
冰醋酸 5 ml

該固定液中的冰醋酸,,對(duì)膠原纖維等組織有膨脹作用,。而甲醛對(duì)組織有收縮作用。兩種試劑的混合使用,,用以抵消彼此間的副作用,。使組織固定達(dá)到優(yōu)良的固定水平

5

醛糖鈣固定液

甲醛100ml
蔗糖300ml
乙酸鈣20g
蒸鎦水90ml

先將蔗糖和乙酸鈣溶于蒸鎦水,后加入甲醛,。該固定液對(duì)于做酶的組織化學(xué)的研究效果較好,,組織固定后,做冰凍切片,,再給予顯示,。

 

酒精:優(yōu)點(diǎn):1、 可保存尿酸結(jié)晶和糖原等物質(zhì),。2,、 能在任何比例的情況下與水混合,如組織的脫水,,切片染色前后都離不開酒精,,通常都用95%的工業(yè)酒精來配成60%、70%,、80%,、90%等不同的濃度來使用。

3,、 可溶解苯類物質(zhì)為染色步驟中的橋梁試劑,。常規(guī)活檢等切片上的石蠟必須除去,才能進(jìn)行染色,能除去石蠟的物質(zhì)有苯及汽油等,,因此稱它為橋梁試劑,。4、 能除去切片上的水份,,使切片無水化,。切片經(jīng)染色后,到*中已*無水,,這樣處理對(duì)于切片的保存是有好處的,,否則,切片將會(huì)褪色,。5,, 可與其它試劑配成多種的混合固定液,加快固定,,它的缺點(diǎn)是:1,、 可溶解脂類物質(zhì),凡要證明組織是否含有脂類和類脂物時(shí),,切不能用含有酒精的固定液去固定組織,,也不能用石蠟切片。2,、 對(duì)組織收縮較大,不宜作單純固定液,。3,、 滲透力不強(qiáng)。當(dāng)用酒精固定組織時(shí),,組織表面很快就被固定,,并形成了一層蛋白膜,這層膜可阻擋固定液向里滲透,,造成了中間組織固定不佳的現(xiàn)象,。4、 可沉淀白蛋白,、球蛋白和核蛋白,,凡經(jīng)酒精固定的組織,核的染色都不好,。5,、 可脫去切片上已著染的各種顏色,切片經(jīng)染色后,,一是必須洗去多余的染液,,二是必須脫去切片上的水。在用酒精洗切片時(shí),必須仔細(xì)地掌握顯微鏡下觀察,,還要掌握酒精的濃度,,低濃底的酒精脫色力強(qiáng),稍不注意,,便可脫去切片上大部分的顏色,。切片脫水時(shí),要較快地通過低濃度的酒精,,以免使已著染的顏色被脫去,。

 

6

Carnoy氏固定液

LF 300ml
冰醋酸 100 ml
95%酒精 600 ml

該固定液固定組織快速,在固定的同時(shí)兼有脫水的作用,。溶液中的lf和酒精,,對(duì)組織的收縮較厲害,但應(yīng)用了冰醋酸,,這種現(xiàn)象便被中和去

7

AF固定液

甲醛 100 ml
冰醋酸 50 ml
95%酒精 850 ml

這種固定液的作用與上液有相似之處,,但要注意的是,凡使用含有醋酸的固定液,,其脫水用具不能使用銅制的脫水盒,,因冰醋酸跟銅離子起反應(yīng),生成醋酸銅,,這種物質(zhì)可沉淀于組織間,,可破壞組織中的抗原,造成免疫組化檢測(cè)的失敗,。應(yīng)用時(shí)應(yīng)多加注意

冰醋酸:優(yōu)點(diǎn)有:1,、 能迅速固定染色質(zhì),助于染色,,用醋酸配成的固定液,,其作用快,固定效果均勻,,對(duì)于染色質(zhì)的固定快,,因此,用其作固定的切片染色好,,在配其它染色液如明礬蘇木素和伊紅時(shí),,常常需加入一定量的醋酸,以促進(jìn)染色,。2,、 能使組織尤其是富含纖維的組織膨脹。各種固定液對(duì)組織都有收縮的作用,,尤其是對(duì)富含纖維的組織,。而它不但不會(huì)使組織收縮,,而且還會(huì)令許多組織發(fā)生膨脹的作用。不足之處:1,、 不能作為單一的固定劑,。

2、 不能凝固蛋白質(zhì),,不能保存白細(xì)胞顆粒,,紅細(xì)胞及含血鐵黃素等。

8

Zenker氏固定液

重鉻酸鉀 25G
SG 50G
蒸餾水 1000ml
冰醋酸 50ml

 

先將重鉻酸鉀和sg溶于水中,,尢其是重鉻酸鉀,,應(yīng)用熱水或加溫的方法將其溶解,然后過濾貯存于帶蓋的玻璃瓶中以防失效,。臨用時(shí),,取貯存液950ml,加入50ml的冰醋酸,,即可使用,。應(yīng)用該固定液固定的組織,一般不要超過24h,,取出組織,,流水沖冼12小時(shí)以上,然后保存于75%-80%的酒精中,,在切片染色前,,必須用碘除去汞鹽的沉著。應(yīng)用該固定液的組織,,細(xì)胞核及細(xì)胞漿染色十分清晰,,特別是要顯示骨骼肌的橫紋時(shí),應(yīng)用本液可獲得滿意的結(jié)果,,但由于其含有醋酸,故不能用于保存細(xì)胞顆粒,,紅細(xì)胞及含鐵血黃素,。

9

Flemming氏液

2%酸水溶液 200ml
1%鉻酸水溶液 700ml
冰醋酸 100ml

該液中的奧酸對(duì)脂肪組織既有固定作用,又有染色作用,,對(duì)有髓神經(jīng)纖維也有固定兼染髓鞘的作用,。如果做HE的染色,該液不適合,。應(yīng)用該液固定的組織,,切片不能太大過厚,一般1-2毫米厚固定時(shí)間1-3天,,后經(jīng)水洗,,保存于80%酒精中,除上述兩液體外,還有Bouin氏液和Carnoy氏液等,。

重鉻酸鉀:  它的優(yōu)點(diǎn)是:1,、 能固定脂肪及類脂物。2,、 為髓鞘及嗜鉻細(xì)胞優(yōu)良的媒染劑,。3、 可配成多種的混合固定液足之處有:1,、 不能沉淀蛋白質(zhì),,它必須和醋酸配成混合固定液,方能發(fā)揮作用,,產(chǎn)生鉻酸,,沉淀蛋白質(zhì)。2,、 具有毒性及產(chǎn)生高溫,。在配制液體時(shí),如清洗劑,,當(dāng)加入硫酸時(shí),,可產(chǎn)生很高的溫度,并揮發(fā)出刺鼻的氣體,,應(yīng)特別注意,。3、 它不能長(zhǎng)期固定組織,,經(jīng)它固定的組織應(yīng)充分水洗后保存于80%酒精中,。

10

Helly氏液

重鉻酸鉀 25g
sheng gong 50g
蒸餾水 1000ml
甲醛 50ml

臨用時(shí)加入甲醛,因其加入后于24小時(shí)后可發(fā)生沉淀而失效,,因用時(shí)應(yīng)特別注意,。該液是白細(xì)胞顆粒的優(yōu)良固定劑,因此凡為白細(xì)胞或造血器官如骨髓,,脾臟及患先天性梅毒之肝臟等,,可用此液固定。此液原配方要求加入硫酸鈉,,但據(jù)我們經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為,,硫酸鈉在液中對(duì)組織無任何作用,故省去

11

Orth氏液

重鉻酸鉀 20g
蒸餾水 1000ml
甲醛 100ml

該液固定組織較緩慢,,不適合于作臨床的活檢固定液,,4毫米厚的組織固定時(shí)間需36-72小時(shí),該液對(duì)于染色質(zhì)的固定好,,顯示清晰,,但可溶解部分紅細(xì)胞和含鐵血黃素,。

重鉻酸鉀的不足之處有:

1、 不能沉淀蛋白質(zhì),,它必須和醋酸配成混合固定液,,方能發(fā)揮作用,產(chǎn)生鉻酸,,沉淀蛋白質(zhì),。

2、 具有毒性及產(chǎn)生高溫,。在配制液體時(shí),,如清洗劑,當(dāng)加入硫酸時(shí),,可產(chǎn)生很高的溫度,,并揮發(fā)出刺鼻的氣體,應(yīng)特別注意,。

3,、 它不能長(zhǎng)期固定組織,經(jīng)它固定的組織應(yīng)充分水洗后保存于80%酒精中

 

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