說明 :

產品說明

GeneTran II是一種新型的脂質體和多聚物轉染試劑,，可用于各種真核細胞系的質粒轉染,，如HEK293、CHO,、COS,、NIH3T3、MCF-7,、PC12,、RKO、C2C12,、鼠胚胎干細胞和纖維原細胞,、間質干細胞、NCCIT,、果蠅細胞,。同時原代細胞也能轉染，如人腫瘤細胞,、大鼠腎上腺嗜鉻細胞,、大鼠和小鼠皮質神經細胞、肝細胞等,。對于懸浮細胞也有較高的轉染效率和較低的毒性,，如HEK 293、小鼠淋巴細胞,、昆蟲細胞（sf9, sf21, High-Five）,。有無血清存在（0-20％）對轉染試劑的效果無影響。

主要特點

高效轉染各種貼壁細胞,。

對胚胎干細胞和原代細胞有較高的轉染效率,。

對懸浮細胞如HEK293和sf9,、sf21、high-five等昆蟲細胞也有很高的轉染效率,。

在同類產品中具有更高的轉染效率和更低的毒性,。

有無血清存在（0-20％）對轉染試劑的效果無影響。

可用于單個質?；蚨鄠€質粒共轉,。

轉染24-72小時后，有高的蛋白表達量,。

性價比高

操作簡便

保存條件

GeneTran 可在4℃（切勿放-20℃）至少保存18個月,。使用之前請先將試劑瞬時離心。

質粒轉染步驟

以下步驟是用于35mm培養(yǎng)皿或6孔培養(yǎng)板轉染真核細胞的,。若用于其他規(guī)格培養(yǎng)皿的轉染,，請參考表1的用量。所有的數(shù)據(jù)和體積都是每孔的用量,。對于絕大多數(shù)的細胞系和原代細胞,，質粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。轉染HEK293細胞可只按1:1混合,。有時優(yōu)化條件也是必須的（參見質粒DNA轉染條件的優(yōu)化,，第7頁）。

A. 轉染貼壁細胞（35 mm培養(yǎng)皿或6孔培養(yǎng)板）

轉染前一天鋪板使轉染時細胞達到60-70%的匯合度,。

1. 對于每一個轉染樣本,，按如下比例配制轉染混合液：

* 不能在轉染混合液中混有Opti-MEM和血清

2. 用槍頭吹打混勻，放置于室溫20-40min,。

3. 將混合液加入1 μL Reagent B,，混勻后，加入到細胞培養(yǎng)皿中,，晃動培養(yǎng)皿混勻培養(yǎng)液,。放入CO₂培養(yǎng)箱。

注：血清濃度對于轉染效果無影響,，經測試高達20%的胎牛血清濃度也不會對轉染效果產生影響,。

4. 在轉染后的18-48小時之間，對細胞進行換液,。轉染18-48小時之后可 檢測基因表達,。如果檢測到蛋白表達，請在轉染后4-5天收集培養(yǎng)液,。

5. 如果要得到穩(wěn)定細胞株,，請在轉染24小時后按1:10傳代培養(yǎng)。

B. 轉染懸浮細胞（35 mm培養(yǎng)皿或6孔培養(yǎng)板）

轉染時保證細胞超過90%的密度

1. 對于每一個轉染樣本,，按如下比例配制轉染混合液：

*  不能在轉染混合液中混有Opti-MEM和血清

2. 槍頭吹打混勻,，放置于室溫20-40分鐘,。

3. 將混合液加入1 μL Reagent B，混勻后,，加入到細胞培養(yǎng)皿中,，晃動培養(yǎng)皿混勻培養(yǎng)液。放入CO2培養(yǎng)箱,。

注：血清濃度對于轉染效果無影響,，經測試高達20%的胎牛血清濃度也不會對轉染效果產生影響。

4. 在轉染后的18-48小時之間,，對細胞進行換液,。轉染18-48小時之后可檢測基因表達。如果有蛋白表達,，請在轉染后4-5天收集培養(yǎng)液,。

5. 如果要得到穩(wěn)定細胞株，請在轉染24小時后按1：10傳代培養(yǎng)

表1各種細胞培養(yǎng)板轉染推薦用量

質粒轉染條件優(yōu)化

前面介紹的轉染步驟是針對一般比較好轉的細胞,。

對于C2C12肌肉細胞系,，F(xiàn)uGENE-6 和Lipofectamine-2000的轉染效率不到10%,，而GeneTran按照下面的體系轉染效率可達70%：

對于其他細胞系,，可參考以下方法優(yōu)化條件：

A． 在35mm培養(yǎng)板中將質粒量增加到3μg，4μg和6μg,。

B． 在35mm培養(yǎng)板中將GeneTran增加到15μL,。

C． 如果轉染效率較高，但死細胞較多,，可降低質粒量到1μg或更低,。也可以減少孵育時間到5-24小時。

D． 可按下表優(yōu)化條件：