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Spectrumlabs透析袋常見問題解答

時間:2016/7/4閱讀:2968
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Q1:如何準備透析膜管,?

透析膜管的準備因膜管材質(zhì)和生產(chǎn)工藝的差別而有所不同。注意,,我們不推薦煮沸處理,,因其可能損壞膜管并改變膜孔徑。

A. 生物技術(shù)級RC,、CE及PVDF膜可以用DI水沖洗15-30分鐘,,去除防腐劑*。

B. Spectra/PorR7 標準級RC膜已經(jīng)預(yù)處理,,去除了重金屬和硫化物,,只需在去離子水中浸泡15-30分鐘,去除*即可,。

C. Spectra/PorR 1-6 標準級RC膜,,一般情況下,在水中漂洗足以去除甘油或防腐劑,,而對于親和研究之類極其敏感的透析應(yīng)用或者重金屬及硫化物會影響透析樣品下游分析的應(yīng)用,,可能需要一些額外的處理以去除在生產(chǎn)過程中引入的痕量水平重金屬及硫化物,,spectrumlabs提供Heavy Metal Cleaning Kit。 

Q2:透析的原理是什么,?一般需要多長時間才能完成,?

透析是指溶質(zhì)在濃度梯度的驅(qū)使下,選擇性擴散通過半透膜,,從而達到大/小分子分離,,膜兩側(cè)濃度平衡,即小顆粒的溶質(zhì)通過膜,,而大分子物質(zhì)不能通過,,被截留在膜另一邊。如果將樣品置于透析膜管內(nèi),,通過置換膜管外部的透析緩沖液,,可將小顆粒物質(zhì)清除,從而達到純化大分子物質(zhì)的目的,。一般來說,一天之內(nèi)置換3-5次緩沖液,,然后在室溫條件下,,放在攪拌臺上隔夜透析,即可達到的透析結(jié)果,。標準的透析操作一般需要16-24小時,。許多因素會影響透析效率,包括:擴散系數(shù),、pH值,、溫度、時間,、物質(zhì)濃度,、樣品體積、透析緩沖液體積,、透析緩沖液的置換次數(shù),、膜表面積、膜厚度,、分子帶電荷及緩沖液攪拌速率,。 

Q3:透析一個樣品需要多少體積的透析緩沖液?緩沖液置換頻率怎么安排,?

透析緩沖液的體積越大,,小分子擴散的驅(qū)動力越大。我們一般推薦緩沖液和樣品的體積比為100:1,,*為500:1,。當擴散速率降低,,膜兩側(cè)溶液趨于平衡時,通過置換緩沖液,,可維持小分子擴散驅(qū)動力和透析速率,。我們一般推薦在12-24小時內(nèi),置換緩沖液2到3次,,具體安排如下: 

*次緩沖液置換:透析開始后2-3小時

第二次緩沖液置換:透析開始后4-5小時

zui后一次緩沖液置換:透析隔夜之前 

Q4:如何選擇正確的截留分子量(MWCO),?

截留分子量應(yīng)該竟可能的大,以使透析速率zui大化,。但是,,為了獲得zui大的樣品回收率,選擇的截留分子量應(yīng)至少為需純化的大分子物質(zhì)分子量的一半,。對于需對幾種分子進行分離的應(yīng)用,,分子之間的分子量差至少為5倍,才能完成有效的膜透析,。若不能滿足分子量差的要求,,可能需要使用其它的分離技術(shù),如色譜方法或切向流過濾,。 

Q5:哪種膜的蛋白質(zhì)結(jié)合率zui低,?

每種膜對不同的分子具有不同的親和性。對于球狀蛋白,,相對的結(jié)合親和性由低到高為CE< RC 

Q6:怎樣為膜管選擇合適大小的膜夾,?

標準RC膜(Spectra/Por 1-7)和生物技術(shù)級RC膜由柔韌的再生纖維素聚合物制造,可使用任何一種透析膜夾密封,。生物技術(shù)級CE & PVDF膜由相對剛性的聚合物制造,,需要使用相對溫和的通用膜夾。鑒于通用膜夾對于所有類型的膜管都能起到很好的密封作用,,如不確定選擇哪種膜夾合適,,使用通用膜夾即可。標準膜夾一般只用于標準級RC膜管,。

膜夾的密封寬度一般需比膜管的扁平寬度長4-10 mm,。通用膜夾的zui小密封寬度為50 mm。對于所有扁平寬度規(guī)格的spectrumlabs生物技術(shù)級膜管,,均有相應(yīng)的膜夾可供選擇,。 

Q7:透析膜的保存時間為多長?

干包裝的透析膜可保存5年,。濕包裝的透析膜(0.1% 的*溶液)保存期限為3年,。輻照滅菌的透析膜可保存1.5年。 

Q8:透析膜變干或凍存之后是否仍可使用,?

濕潤的透析膜變干之后,,孔徑受到不可逆的影響,,膜變得脆弱易碎,容易泄露,,不推薦繼續(xù)使用,。

透析膜凍存之后,冰晶會使膜破裂,,導致泄露,,此時不推薦使用該膜。

Q9:透析膜*不含內(nèi)毒素嗎,?

spectrumlabs確認所有透析膜不含有內(nèi)毒素,,符合普通實驗室使用規(guī)格要求。

Q10:我需要擔心透析膜上的皺紋,、滾痕或折線嗎,?

只要膜是完整的,滾痕或者折線不會影響膜的擴散特性,。 

Q11:CE膜比RC膜更具剛性,,且不透明嗎?

纖維素酯(CE)膜內(nèi)的聚合物交聯(lián)形成相對剛性的晶格,,而再生纖維素(RC)聚合物形成更加柔韌的網(wǎng)格結(jié)構(gòu),。不透明性是由網(wǎng)格中孔眼的大小所決定的,孔眼越大,,膜越不透明。

Q12:透析膜可以化學密封或熱密封嗎,?

CE和RC透析膜只能機械密封,,但PVDF透析膜可以機械密封或熱密封,通常用于樣品“封裝”目的,。 

Q13:處理相同的蛋白樣品,,Spectra/PorR 透析膜可重復使用嗎?

我們不推薦重復使用透析膜,,因為特定的處理操作可能會對膜造成污染,,一定的透析條件(pH值、溫度,、化學接觸等)也會對膜的完整性造成損害,,和/或?qū)е滦孤貏e是在打開和重新夾上膜夾時,。 

Q14:膜孔徑有多,,什么是MWCO?

透析膜微觀下呈海綿狀結(jié)構(gòu),,因此,,更適合通過評定其截留性能來間接地定義“孔徑”,,亦即“截留分子量”(Molecular Weight Cut Off,MWCO),。MWCO定義為在17個小時內(nèi),,膜截留率為90%的溶質(zhì)分子量?;诖硕x,,選擇透析膜時,MWCO應(yīng)小于需要截留的分子的大小,。 

Q15:透析膜Spectra/PorR 2和4有什么區(qū)別,?

Spectra/PorR  2和4都有12-14 kD的截留分子量。Spectra/PorR 透析膜更適合溫和透析,,Spectra/PorR 2可提供特定的更大和更小的扁平寬度,,和/或滲透性;也就是說,,Spectra/PorR 2的水滲透性比Spectra/PorR 4更*,。

Q16:關(guān)于膜表面積和樣品量之間的關(guān)系有沒有經(jīng)驗法則?

表面積與體積的比值取決于膜管扁平寬度,。如果有兩段相同長度的膜管,,扁平寬度較小的膜管具有較高的比表面積,而扁平寬度較大的膜管比表面積相對較小,,也就是說,,前者的透析速率更快。原因是扁平寬度較小的膜管,,溶質(zhì)的擴散距離較短,,溶質(zhì)之間通過膜孔的競爭也較小。而扁平寬度大,,亦即溶質(zhì)到達膜表面的距離也較長,,溶質(zhì)之間對膜孔的競爭也較大。一般而言,,比表面積越大,,透析越快。 

Q17:如果膜兩側(cè)的摩爾滲透壓濃度相等,,但濃度梯度仍然存在,,物質(zhì)的通過效率如何?

大多數(shù)透析結(jié)束時膜兩側(cè)滲透壓相同,。透析過程是由膜管內(nèi)外兩側(cè)的濃度梯度驅(qū)動的,。如果滲透壓力有很大的差別,水會通過膜以平衡膜兩側(cè)的滲透壓。如果過多的水通過膜,,透析膜管可能會隨水運動的方向增大或縮小,,在體積增加到一定程度時,有可能導致膜夾松動或膜管破裂,。 

Q18:進行超濾時,,透析膜能承受多大的壓力?

透析膜設(shè)計不適合用于壓力過濾,。在不影響截留分子量的前提下,,zui大推薦壓力為1.5 psi。 

Q19:一般推薦使用哪種透析液(緩沖液),?

生物分子必須保存在嚴格的pH值控制條件下,,以穩(wěn)定其分子極性。典型的透析緩沖液pH范圍為6-8,。以下為常用的幾種可以作為緩沖液的生化溶液:

·                水

·                PBS

·                TBS

·                HEPES

·                氨基酸緩沖液·                 

Q20:為什么使用微米vs道爾頓(MW)單位,,怎么轉(zhuǎn)換?

溶解的分子大小以分子量來定義,,單位為道爾頓,,而顆粒和細胞大小常以直徑來定義,由于分子的結(jié)構(gòu)和形態(tài)不同,,相同分子量的物質(zhì),,分子大小和形態(tài)可能相差較大,兩者之間沒有的對應(yīng)關(guān)系,。出于這個原因,,許多常見的生物材料都已特別定性,并將大約的尺寸標注在轉(zhuǎn)換表上作為估算的參考,,以用于透析,、超濾和微濾應(yīng)用。道爾頓與微米單位之間的轉(zhuǎn)化,,請參考透析袋截留分子量,孔徑的關(guān)系

Q21:對于鹽濃度較高的樣品,,*的透析方法是什么,?

如果可能,我們推薦使用低鹽濃度的緩沖液,。不推薦直接使用純DI水作為緩沖液,,因為滲透壓力可能將水引入膜管,使樣品體積膨脹并可能導致膜管破裂,。使用一系列濃度逐漸降低的溶液作為緩沖液可防止?jié)B透壓力導致的膜管膨脹,。每次緩沖液置換,可將溶質(zhì)濃度降低十分之一,也就是說,,透析一個5M NaCl的樣品,,可使用500 mM NaCl的緩沖液。 

Q22:可以使用繩子結(jié)扎膜管,,而不使用膜夾嗎,?

我們不推薦使用繩子結(jié)扎膜管。因為繩結(jié)對膜管的損害具有很大的不確定性,,并且可能不能提供有效的密封,,而導致泄露。只有膜夾才能提供足夠的密封性,,從而保護樣品,。 

Q23:透析膜管應(yīng)該剪多長? 

對于每種膜管扁平寬度,,spectrumlabs提供相關(guān)的容積/長度比,,可方便計算透析樣品所需的膜管長度。如果扁平寬度為16 mm,,容積/長度比為0.79 ml/cm,,要容納5 ml的樣品,則需要大約6.5 cm長的膜管,。但是,,為保持樣品漂浮,一般需要在頂部空間預(yù)留10-20%膜長(約為1 cm),。此外,,也需在兩端為膜夾各預(yù)留2 cm。所以總的膜管長度應(yīng)至少為11.5 cm,。

可根據(jù)以下公式計算膜管長度:

總長度=(樣品體積)/(容積/長度)+(額外的10-20%)+4 cm

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