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透析袋通常是由半透膜制成的袋狀容器,。在生物大分子的制備過程中,除去鹽,、少量有機(jī)溶劑,、生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品時(shí)都要用到透析的技術(shù)-透析袋。
透析只需要使用的半透膜即可完成,。通常是將半透膜制成袋狀,,將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi),,將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi),,而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外,,直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液",,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液"或“透析液",。
透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓,擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的,。透析的速度反比于膜的厚度,,正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,,通常是4℃透析,,升高溫度可加快透析速度。
透析膜可用動(dòng)物膜和玻璃紙等,,但用的zui多的還是用纖維素制成的透析膜,,目前常用的是美國SPECTRUM公司生產(chǎn)的各種尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的zui小分子量,,縮寫為MwCO)通常為1萬左右,。
商品透析袋制成管狀,其扁平寬度為24 mm~50 mm不等,。為防干裂,,出廠時(shí)都用10%的甘油處理過,并含有極微量的硫化物,、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì),,它們對(duì)蛋白質(zhì)和其它生物活性物質(zhì)有害,用前必須除去,??上扔?0%乙醇煮沸1小時(shí),再依次用50%乙醇,、0.01 mol/L碳酸氫鈉和0.001 mol/L EDTA溶液洗滌,,zui后用蒸餾水沖洗即可使用。實(shí)驗(yàn)證明,,50%乙醇處理對(duì)除去具有紫外吸收的雜質(zhì)特別有效。使用后的透析袋洗凈后可存于4℃蒸餾水中,,若長時(shí)間不用,,可加少量NaNO3,以防長菌,。洗凈涼干的透析袋彎折時(shí)易裂口,,用時(shí)必須仔細(xì)檢查,,不漏時(shí)方可重復(fù)使用。
新透析袋如不作如上的特殊處理,,則可用沸水煮五至十分鐘,,再用蒸餾水洗凈,即可使用,。使用時(shí),,一端用橡皮筋或線繩扎緊,也可以使用特制的透析袋夾夾緊,,由另一端灌滿水,,用手指稍加壓,檢查不漏,,方可裝入待透析液,,通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過程中,,透析的小分子量較大時(shí),,袋外的水和緩沖液過量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質(zhì)溶液透析過晚時(shí),,體積增加50%是正常的,。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,,還可使用磁子攪拌,。透析的容器要大一些,可以使用大燒杯,、大量筒和塑料桶,。小量體積溶液的透析,可在袋內(nèi)放一截兩頭燒圓的玻璃棒或兩端封口的玻璃管,,以使透析袋沉入液面以下,。
檢查透析效果的方法是:用1% BaCl2檢查(NH4)2SO4,用1% AgNO3 檢查NaCl,、KCl等,。
為了提高透析效率,還可以使用各種透析裝置,。使用者也可以自行設(shè)計(jì)與制作各種簡易的透析裝置,。
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