細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底（U型和V型）,；培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6,、12,、24,、48、96,、384,、1536 孔等,；根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板。具體選擇時(shí)根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類型,、所需培養(yǎng)體積及不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ā?br />
 

（1）平底和圓底（U型和V型）培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇：
貼壁細(xì)胞一般用平底培養(yǎng)板,。懸浮型細(xì)胞的培養(yǎng)一般用V型。
U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細(xì)胞 ,。V型培養(yǎng)板有時(shí)用做免疫學(xué)血凝集的實(shí)驗(yàn),。

不同型狀的板子自然有不同用途。平底的什么類型的細(xì)胞都可用﹐但當(dāng)細(xì)胞數(shù)目較少﹐如做克隆時(shí)﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等實(shí)驗(yàn)時(shí)﹐無論貼壁和懸浮細(xì)胞﹐一般均用平底板,。至于U或V型板﹐一般在某些特殊要求時(shí)才使用,。如在免疫學(xué)方面﹐當(dāng)做兩種不同淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)時(shí)﹐需要二者相互接觸以刺激﹐因此﹐一般需要U型板﹐因細(xì)胞會(huì)由于重力的作用而聚集在一個(gè)很小的范圍內(nèi)。V型板的用途更少﹐一般用于細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)時(shí)﹐為了使效靶細(xì)胞緊密接觸﹐常使用V型板﹐但這種試驗(yàn)也可用U型板替代(加入細(xì)胞后﹐低速離心)如果是養(yǎng)細(xì)胞的話,，通常是選用平底的,，另外要特別注意材質(zhì)， 標(biāo)示"Tissue Culture (TC) Treated"就是養(yǎng)細(xì)胞用的,。

圓底的好像沒聽說過拿來養(yǎng)細(xì)胞,。 圓底的通常是拿來做分析， 化學(xué)反應(yīng),， 或是保存樣品用的,，因?yàn)閳A底比較好將液體吸得干凈，如果用平底的就不好吸了,。 不過,， 如果你是要測(cè)吸光值的話，一定要買平底的才行,。大部分細(xì)胞培養(yǎng)都用平底培養(yǎng)板,，便于鏡下觀測(cè)、有明確的底面積,、細(xì)胞培養(yǎng)液面高度相對(duì)一致,，還便于MTT檢測(cè)。圓底培養(yǎng)板主要用于同位素?fù)饺氲膶?shí)驗(yàn),，需要用細(xì)胞收集儀收集細(xì)胞的培養(yǎng),，如“混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)”等,。


（2）細(xì)胞培養(yǎng)常見問題與解答

問：我看到培養(yǎng)板有4,、6、12,、24,、48、96孔幾種規(guī)格 ,，但不知道到底什么實(shí)驗(yàn)用哪種規(guī)格,。
答：要根據(jù)你具體的實(shí)驗(yàn)要求,，流式一般用6孔，MTT一般用96孔,，細(xì)胞爬片一般用24孔等,，要具體根據(jù)你實(shí)驗(yàn)來定。

問：請(qǐng)問哪位高手知道Terasaki板是什么培養(yǎng)板,，與普通細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別,？
答：Terasaki plate主要是用于晶體學(xué)研究，產(chǎn)品設(shè)計(jì)便于對(duì)晶體的觀察與結(jié)構(gòu)分析,。有兩種sitting 和handingdrop兩種方法,，兩種方法應(yīng)用產(chǎn)品的外形結(jié)構(gòu)也不同。材料上選擇crystal class polymer,，特殊的材料有利觀察晶體結(jié)構(gòu),。
細(xì)胞培養(yǎng)板主要是PS材料。材料是treated sufface,。便于細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)與伸展,。當(dāng)然還有浮游細(xì)胞的生長(zhǎng)材料，同時(shí)還有l(wèi)owbinding surface,，有關(guān)更多實(shí)驗(yàn)材料上的應(yīng)用與對(duì)材料的選擇,。

問：我想測(cè)吸光度用酶標(biāo)儀，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板行嗎,？請(qǐng)問酶標(biāo)板 多孔細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別,？
答：用多空細(xì)胞培養(yǎng)板測(cè)吸光度肯定可以拉，我們經(jīng)常用它來做樣品的蛋白定量和MTT檢測(cè),。
區(qū)別：酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴,，細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng)，但也可以用來測(cè)蛋白濃度,；酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板,，一般不能用做細(xì)胞培養(yǎng)，它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測(cè),，它需要更高的要求還需要特定的酶標(biāo)工作液,。常用不同培養(yǎng)板的孔底面積及推薦加液量：不同孔板所加培養(yǎng)液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范圍,，結(jié)合不同孔的底面積就可算出各培養(yǎng)孔的適宜加液量,。若加液量過多會(huì)影響氣體（氧氣）交換，而且在搬動(dòng)過程中易溢出造成污染,。具體所加細(xì)胞密度依實(shí)驗(yàn)的目的不同靈活掌握,。

(3)細(xì)胞培養(yǎng)板的密閉和污染問題
細(xì)胞培養(yǎng)板的加樣和操作：細(xì)胞培養(yǎng)板在進(jìn)行細(xì)胞操作時(shí)同樣遵循嚴(yán)格無菌的原則，各項(xiàng)操作要保證規(guī)范,、科學(xué),，不對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)造成額外的影響,。這其中zui常見的問題就是如何保證加樣后細(xì)胞的均勻和盡量減少換液對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響。

問：96,，24孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿的蓋子都很松,，這樣是方便了透氣，但是細(xì)菌,、霉菌等污染物會(huì)不會(huì)也隨著溜進(jìn)去呢,？
答：1.蓋子很松，屬于半開放培養(yǎng),，這樣的目的是透氣（實(shí)際上是為了使培養(yǎng)皿外的co2能夠與培養(yǎng)皿充分交換,，維持培養(yǎng)基的pH值）。
2.凡事有利必有弊,，這樣當(dāng)然增加了污染的可能性,。此外這樣還會(huì)使培養(yǎng)皿內(nèi)的液體蒸發(fā)，這對(duì)于定量的藥物來說就顯得值得注意了,。所以以下二條措施是必須的a培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須清潔（定期紫外線照,，酒精擦洗，盡量少開關(guān)培養(yǎng)箱）b培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度必須始終保持為100%（培養(yǎng)箱內(nèi)放置無菌蒸餾水的水槽）,。
就好像培養(yǎng)皿,，也是一個(gè)蓋倒扣的容器，也不會(huì)污染,。主要是因?yàn)樯w子“L”型邊緣產(chǎn)生氣流負(fù)壓的緣故,，灰塵上面才附著有微生物，而氣流攜帶的灰塵是無法通過產(chǎn)生負(fù)壓的蓋邊緣的,。而透氣作用只是通過空氣的擴(kuò)散,，不會(huì)產(chǎn)生氣流，所以只會(huì)透氣不會(huì)透菌,。
我使用24孔板,，在其中的某些孔中有操作(在超凈臺(tái)內(nèi))，而其它孔中還有細(xì)胞要培養(yǎng).我很擔(dān)心這樣會(huì)污染,，不知道要注意什么?大家不知道有什么好的建議,。
在超凈臺(tái)內(nèi)如果操作規(guī)范的話應(yīng)該可以的，我想你可以充分利用培養(yǎng)版的蓋子,，盡量只暴露要操作的孔,，將其它孔用蓋子蓋起來。這是我的一點(diǎn)粗淺的見解,，拋磚引玉吧,！
使用前綜合考慮一下，充分使用所以的孔,；如果只需要使用少數(shù)的孔可以只用一邊的,，其余用蓋子蓋住，我習(xí)慣于先用右側(cè)的孔（右手加樣方便）,。
其實(shí)自己感覺只要注意無菌操作,，一般是不會(huì)污染的。操作時(shí)用幾塊玻片把板子一側(cè)墊高,，不要把蓋子全打開,，一般沒問題。

(4)細(xì)胞分布不均及解決辦法

問：我的細(xì)胞接種培養(yǎng)板,，細(xì)胞總是聚集在周邊部分,，該如何處理啊,？我看園子里有的戰(zhàn)友的細(xì)胞卻是聚集在中間,，是不是板子的質(zhì)量問題啊,？
答：請(qǐng)問你的細(xì)胞是如何混勻的,？是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板？如果是后者,，而且是轉(zhuǎn)圈搖勻的話,，很有可能由于離心力的作用使細(xì)胞甩到周邊部分，導(dǎo)致細(xì)胞中間少,，四周多,！自己可是試試！
周邊一般是相對(duì)會(huì)多一點(diǎn),，但是中間的數(shù)量也不會(huì)很少啊~~ 鋪板的時(shí)候我也沒有特異去振蕩培養(yǎng)板,。
大概是板子的質(zhì)量問題吧或者是不是鋪板時(shí)候的細(xì)胞密度太低了？我用的corning的板 ,。
一個(gè)好辦法：在你培養(yǎng)種板之前,，把培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里進(jìn)行幾個(gè)小時(shí)的飽和后再取出，種入細(xì)胞時(shí)力量要輕,，可采取用滴頭在培養(yǎng)板孔的側(cè)面慢慢加入讓細(xì)胞懸液流入板孔中,，培養(yǎng)的細(xì)胞基本是均勻生長(zhǎng)。記住千萬不要用振蕩器振蕩,，否則你的細(xì)胞就會(huì)想你說得那樣聚積在一起,。
我今天把培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里幾個(gè)小時(shí)，適當(dāng)?shù)陌鸭?xì)胞密度加大了一下,，另外多加了一點(diǎn)培養(yǎng)液,，今晚看細(xì)胞鋪的挺好的。我認(rèn)為有兩種可能解決你問題的辦法:1.加入前吹打均勻;2.從多孔板側(cè)邊或底邊緩慢加入,。

問：我在做原代培養(yǎng)時(shí)也遇到過這種情況,，我一直以為培養(yǎng)皿鋪膠不均勻會(huì)導(dǎo)致這種現(xiàn)象,，因?yàn)榛靹虻难芏渭尤氲脚囵B(yǎng)皿中時(shí)，在相差顯微鏡下血管段均勻分布在培養(yǎng)皿中,，24h后貼壁的血管段就是周邊多,，中間相對(duì)少些。下次我要試試hkqu戰(zhàn)友的方法看能否改變這種現(xiàn)象,。

答：這種現(xiàn)象很正常呀,，不知你仔細(xì)觀察過沒有，孔直徑愈小,，這個(gè)現(xiàn)象越明顯,，我試過，24,、96孔板這種現(xiàn)象不可避免,，因?yàn)橐后w的附壁使得孔內(nèi)培養(yǎng)液不是成一個(gè)液平面，而是周邊高,，就像凹鏡一樣,，而使用這兩種孔板由于需要加干預(yù)等原因而不能加足量培養(yǎng)液，使得細(xì)胞隨培養(yǎng)液一起出現(xiàn)“邊集”現(xiàn)象,，如果為了使孔中央也有均勻細(xì)胞而增加接種細(xì)胞數(shù)量的話,，這要看你需要觀察何種指標(biāo)，如果是MTT,，免疫組化的話會(huì)因?yàn)榧?xì)胞成層而影響結(jié)果,。

 

(5)6孔板接種和換液?jiǎn)栴}：
問：我的細(xì)胞傳代很正常，但一種到六孔板里（不管加藥和對(duì)照）,，總有兩三個(gè)孔（隨機(jī)）細(xì)胞長(zhǎng)得不好,，很小，像破碎了,。有人遇到過這種情況嗎,？到底是啥原因呢？請(qǐng)各位指點(diǎn)
答：可能跟你加液的溫度有關(guān),。如果你細(xì)胞剛剛拿出來?yè)Q液加液,，培養(yǎng)基也是從4度冰箱拿出來不久，很容易細(xì)胞就會(huì)凍死了,。建議你把培養(yǎng)基先在培養(yǎng)箱里邊孵育15min先,。
另外，跟你細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)也有關(guān),。加藥之前的細(xì)胞可以用高點(diǎn)的血清濃度培養(yǎng),。保證細(xì)胞狀態(tài)良好。
或者放在37度水浴鍋里孵育也可以，或者是培養(yǎng)板本身的問題,，你再換換其它培養(yǎng)板試試看,。再有可能就是細(xì)胞狀態(tài)問題了，種板時(shí)的血清濃度調(diào)高試一下

問：zui近幾天,，我用六孔培養(yǎng)板接種細(xì)胞,，培養(yǎng)24小時(shí)后更換培養(yǎng)基,，在更換培養(yǎng)基之前,，顯微鏡觀察到細(xì)胞貼壁，狀態(tài)非常的好,，更換了培養(yǎng)基后,，立即用顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)每個(gè)孔中都近乎有一半的細(xì)胞表現(xiàn)出近乎死亡的狀態(tài),。細(xì)胞變得非常小,，產(chǎn)生大量的碎片，而另一半的細(xì)胞一切正常,，異常細(xì)胞與正常細(xì)胞之間存在一條分水嶺,，上半個(gè)圓是好的，下半個(gè)圓就不好,，這是怎么一回事,？

答：你可以看一下是不是培養(yǎng)板沒放水平。有一回我也出現(xiàn)過這種情況,。
你的培養(yǎng)液如何,，如果培養(yǎng)液過期，細(xì)胞就不會(huì)貼壁,。換一點(diǎn)新配制的培養(yǎng)液試一試,。
我也經(jīng)常碰到，我想可能是板的問題,，換一個(gè)牌子的板或換用培養(yǎng)瓶就沒問題了,。
不知樓主所需換液的培養(yǎng)板多不多，換培養(yǎng)基的時(shí)候如果沒有注意風(fēng)機(jī)的影響,，特別是所需換液的培養(yǎng)板很多時(shí),，容易使細(xì)胞因風(fēng)吹失水而干縮破裂。如果如此,，換液時(shí)應(yīng)該逐個(gè)培養(yǎng)板進(jìn)行,，別怕浪費(fèi)吸管，注意操作的效率,！

(6)24孔板接種問題：
問：把細(xì)胞消化接種到24孔板之后,，已經(jīng)四天了，老是每孔的中間部分長(zhǎng)不滿，每天換液時(shí)都用PBS清洗,，第二天換液時(shí)都出現(xiàn)同樣的情況,，每孔的邊緣長(zhǎng)的很好，中央大量死細(xì)胞,？

答：我是選擇孔內(nèi)鋪蓋玻片,，在玻片上種植。每次換液都用PBS洗,，必要的步驟嗎,？另外，也有可能和細(xì)胞種類有關(guān)或者和培養(yǎng)液有關(guān),？
我想你的培養(yǎng)液可能加的太少了,。由于表面張力的作用，培養(yǎng)板的邊緣液體會(huì)向上走,，造成培養(yǎng)液面呈現(xiàn)一個(gè)凹面（就像量筒的液體凹面一樣）,，中央的細(xì)胞正好在凹面的zui低處，培養(yǎng)液少,，細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)不夠,，甚至干涸掉，空氣中的氧氣也會(huì)造成損傷,，即使有增值過來的細(xì)胞也會(huì)死掉,。
另外，檢查一下培養(yǎng)箱底部的水是否少了,，如果少了,，箱內(nèi)的空氣濕度不夠，會(huì)造成培養(yǎng)液揮發(fā)加快,，這樣即使剛加的液體不少,，過一段時(shí)間，由于蒸發(fā),，液體量會(huì)減少,，造成中央干涸。并且這樣會(huì)改變了培養(yǎng)液的成分濃度,，造成滲透壓過高,。
個(gè)人經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為這是物理問題:24孔板小，細(xì)胞接種進(jìn)去后是很難搖均勻的,，結(jié)果導(dǎo)致細(xì)胞重貼壁后呈現(xiàn)四周密中間稀的狀況.至于中間較多死細(xì)胞,，如果是懸浮狀的話，也一樣是物理問題,。接種后比較粗暴的碰撞,，似乎對(duì)搖均勻細(xì)胞有一定效果.

在為多孔板培養(yǎng)的細(xì)胞換液時(shí)一定要注意,，不要把培養(yǎng)基吸得太干，如果*吸取,，很容易造成細(xì)胞干涸,，這樣的話細(xì)胞會(huì)很快死亡。我有一段時(shí)間總是遇到這個(gè)問題,，一個(gè)板子中總有一兩個(gè)孔出現(xiàn)細(xì)胞大量死亡,，后來發(fā)現(xiàn)是上面的原因。現(xiàn)在我做的時(shí)候如果必須把液體吸干,，我會(huì)一個(gè)一個(gè)空來吸取,，zui多一次不超過3孔，然后馬上加入液體,，同時(shí)在作轉(zhuǎn)染時(shí),，我會(huì)在吸液和加液時(shí)將風(fēng)機(jī)關(guān)掉,，這樣基本上會(huì)避免細(xì)胞死亡,。

同時(shí)你所說的細(xì)胞周圍密而中間稀疏，大約有如下原因：
1.培養(yǎng)液加得太少,。主要是由于液體張力的問題,。
2.細(xì)胞接種后震蕩太厲害了。由于離心力作用導(dǎo)致細(xì)胞分布到周圍,。

細(xì)胞分布均勻與否有一點(diǎn)很關(guān)鍵,，即每種細(xì)胞是有個(gè)體差異的，別人的細(xì)胞操作不一定適合于你.所以要靠自己摸索,，且找出專屬于自己細(xì)胞的一套規(guī)律,，有如下經(jīng)驗(yàn)：
1.所有待接種的細(xì)胞懸液在種板前一定要用吸管混勻。
2.按資料記載,，24孔板的液體量為1ml,，個(gè)人也覺得1ml的量足矣。
3.接種時(shí),，要慢慢加樣,，且記得輕微旋轉(zhuǎn)槍頭，這樣做對(duì)細(xì)胞均勻分布有一定效果,。
4.接種后直接放入培養(yǎng)箱讓細(xì)胞適應(yīng)培養(yǎng)板這個(gè)新的環(huán)境,，個(gè)人認(rèn)為沒有必要在室溫放置一段時(shí)間。
5.根據(jù)細(xì)胞的特性,，細(xì)胞均喜歡聚集在邊緣生長(zhǎng),，所以我考慮到，你的問題還有可能是接種時(shí)的細(xì)胞密度不夠,，導(dǎo)致周邊密集,，中間稀疏的錯(cuò)覺。你的拌種密度是多少？
另"要慢慢加樣,，且記得輕微旋轉(zhuǎn)槍頭"的意思就是:加樣不能太快,，避免細(xì)胞在一個(gè)加樣處聚集，且注意在不同的部位進(jìn)行加樣,，即邊加邊活動(dòng)槍頭,，人為使細(xì)胞趨于均勻分布，我個(gè)人覺得有一定的效果,，不知這次我解釋清楚沒有,。