考馬斯亮藍(lán)coomassie brilliant blue一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)濃度成正比,，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。

考馬斯亮藍(lán)有G-250和R-250兩種,。

考馬斯亮藍(lán)G-250在游離狀態(tài)下呈紅色,，zui大光吸收在465nm；當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌鞍踪|(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長下有zui大光吸收,。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比,。R-250與蛋白質(zhì)反應(yīng)雖然比較緩慢，但是可以被洗脫下去,，所以可以用來對電泳條帶染色,。

染色————————————————————————————————————

蛋白質(zhì)與G-250結(jié)合在2min左右的時間內(nèi)達(dá)到平衡，完成反應(yīng)十分迅速,；其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定,。該法是1976年Bradford建立，試劑配制簡單,，操作簡便快捷,，反應(yīng)非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍,，可測定微克級蛋白質(zhì)含量,，測定蛋白質(zhì)濃度范圍為0～1 000μg/mL，是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測定方法,。

有G-250和R-250兩種,。其中G-250由于與蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)十分迅速，常用來作為蛋白質(zhì)含量的測定,。R-250與蛋白質(zhì)反應(yīng)雖然比較緩慢,，但是可以被洗脫下去，所以可以用來對電泳條帶染色,。

測定含量————————————————————————————————————

簡介

該方法用于大多數(shù)蛋白質(zhì)的定量是比較的,，但不適用于小分子堿性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶,。去污劑的濃度超過0．2%影響測定結(jié)果,。如TritonX-100、SDS,、NP-40等,。常用于細(xì)胞骨架的檢驗。

濃染液

將100mgG-250溶于50mL 95%乙醇,，加入100mL濃磷酸,，然后，用蒸餾水補(bǔ)充至200mL,，此染液放4℃至少6個月保持穩(wěn)定,。

樣本準(zhǔn)備

盡量使用與待測樣本性質(zhì)相近的蛋白質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)品，例如測定抗體,，可用純化的抗體作為標(biāo)準(zhǔn),。如果待測樣本是未知的,，也可用抗體作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白。通常在20μg—150μg/100μL之間繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

溶解

將待測樣本溶于100~1緩沖溶液中,，該緩沖溶液應(yīng)與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的緩沖溶液相同(用PBS)。

稀釋

按1：5用蒸餾水稀釋濃染料結(jié)合溶液,，如出現(xiàn)沉淀,，過濾除去。

作用

每個樣本加5mL

稀釋的染料結(jié)合溶液,，作用5～30min,。染液與蛋白質(zhì)結(jié)合后，將由紅色變?yōu)樗{(lán)色,，在595nm波長下測定其吸光度,。注意，顯色反應(yīng)不得超過30min．

計算

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算待測樣本的濃度,。

處理方法————————————————————————————————————

和皮膚中蛋白質(zhì)通過范德華力結(jié)合，反應(yīng)快速,，并且穩(wěn)定,，無法用普通試劑洗掉。待一兩周左右,，皮屑細(xì)胞自然衰老脫落即可無礙,。