注意：1,，分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復(fù)溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫
度在20℃±2℃時(shí)分離效果。
2,，使用無靜電反應(yīng)的離心管,，推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。
3,，所有操作過程一定要在無菌條件下進(jìn)行,。
4，*抗凝劑選擇：EDTA,、枸櫞酸,、肝素。應(yīng)注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑
體積,。
A. 小量分離-使用1-2ml新鮮抗凝血,，骨髓，臍帶血：
1,，取新鮮抗凝血1-2ml,，與全血及組織勻漿稀釋液（Cat#：2010C1119）1:1 混勻；
2,，小心加于與混合液等體積的細(xì)胞分離液之液面上,；
3，以400g（約1500 轉(zhuǎn)/分）離心15 分鐘（半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子）,；
此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分為四層,。*層;為血漿層。第二層,；為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞
層,。第三層；為透明分離液層,。第四層,；為紅細(xì)胞層,。收集第二層細(xì)胞放入含4-5ml 細(xì)胞洗滌液
（Cat#：2010X1118）的試管中，充分混勻后,，以1800 轉(zhuǎn)/分離心20 分鐘,，棄去上清留沉淀細(xì)胞
重新懸起。重復(fù)洗滌2 次即得所需細(xì)胞,。
B. 中量分離-使用5-10ml新鮮抗凝血,，骨髓，臍帶血：
1,，取新鮮抗凝血5-10ml,，與全血及組織勻漿稀釋液（Cat#：2010C1119）1:1 混勻；
2,，將混合液小心疊加于細(xì)胞分離液之液面上,；（混合液：分離液=2：1）
3，以500g（約1800 轉(zhuǎn)/分）離心15 分鐘（半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子）,；
此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分為四層,。*層;為血漿層。第二層,；為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞
層,。第三層；為透明分離液層,。第四層,；為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含10ml 細(xì)胞洗滌液
（Cat#：2010X1118）的試管中,，充分混勻后,，以1800 轉(zhuǎn)/分離心20 分鐘，棄去上清留沉淀細(xì)胞
重新懸起,。重復(fù)洗滌2 次即得所需細(xì)胞,。
C. 大量分離I-使用20ml新鮮抗凝血，骨髓,，臍帶血：
1,， 取新鮮抗凝血20ml 以200g（約1100 轉(zhuǎn)/分）離心20 分鐘棄去血漿；
2,，向棄去血漿的血細(xì)胞中加入全血及組織勻漿稀釋液（Cat#：2010C1119）12ml 小心混勻,；
3，將混合液小心疊加于細(xì)胞分離液之液面上,；（混合液：分離液=2：1）
4,，以600g（約2000 轉(zhuǎn)/分）離心15 分鐘（半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子）；
此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分為四層,。*層;為血漿層,。第二層；為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞
層,。第三層,；為透明分離液層。第四層,；為紅細(xì)胞層,。收集第二層細(xì)胞放入含20ml 細(xì)胞洗滌液
（Cat#：2010X1118）的試管中，充分混勻后,，以1800 轉(zhuǎn)/分離心20 分鐘,，棄去上清留沉淀細(xì)胞重新懸起。重復(fù)洗滌2 次即得所需細(xì)胞,。
D. 大量分離II-使用50ml新鮮抗凝血,，骨髓，臍帶血：
1,， 取新鮮抗凝血50ml 與HES-TBD550 液1:1 混合后再與1 份注射用生理鹽水混勻20±2℃
靜置30 分鐘,。吸取混濁的上清液備用，棄去底部紅細(xì)胞,。
2,，將步驟1 中留取的上清液以200g（約1100 轉(zhuǎn)/分）離心20 分鐘棄去上清保留沉淀細(xì)胞；
3,，向沉淀的細(xì)胞中加入全血及組織勻漿稀釋液（Cat#：2010C1119）20ml 小心混勻,；
4，將混合液小心疊加于細(xì)胞分離液之液面上,；（混合液：分離液=2：1）
5,，以600g（約2000 轉(zhuǎn)/分）離心15 分鐘（半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子）；
此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分為四層,。*層;為血漿層,。第二層；為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞
層,。第三層,；為透明分離液層。第四層,；為紅細(xì)胞層,。收集第二層細(xì)胞放入含20ml 細(xì)胞洗滌液
（Cat#：2010X1118）的試管中，充分混勻后,，以1800 轉(zhuǎn)/分離心20 分鐘,，棄去上清留沉淀細(xì)胞
重新懸起。重復(fù)洗滌2 次即得所需細(xì)胞,。
