96孔板血液gDNA小量提取試劑盒實驗細則

時間：2013/1/8閱讀：1661

訂貨咨詢：,；,；；

在線：1085201427 865512910 1730443944

備注：本公司銷售的所有產(chǎn)品僅用于生化科研試驗

產(chǎn)品名稱 :

96孔板血液gDNA小量提取試劑盒

品牌 :

BIOMIGA

貨號 :

GD2815-01

規(guī)格 :

4*96/20*96/20*96

詳細資料：

圖片：

開始之前

請閱讀完整的手冊,，以熟悉的EZgene ^TM 96孔的血液DNA試劑盒過程,。

1。準(zhǔn)備一個足夠的的洗脫緩沖和分裝成部分的蛋白酶K原液,。存儲每個等分試樣在-20℃下，在使用前解凍,。每個樣品,，將要求25μL該溶液。

升 GD2815-00溶解洗脫緩沖液2.5毫升

升 GD2815-01與10 mL的洗脫緩沖液溶解

升 GD2815-02溶解50.0毫升洗脫緩沖液

2,。如下,，儲存在室溫下用無水乙醇稀釋DNA濃縮洗滌緩沖液。

升 GD2815-00加入160毫升（96％-100％）乙醇

升 GD2815-01加入640毫升（96％-100％）乙醇

升 GD2815-02加入乙醇,，每瓶640毫升（96％-100％）

3,。預(yù)熱洗脫緩沖液在65℃下

4。調(diào)整到250μL的樣品的體積,。小于250μL的樣品,，加入適當(dāng)體積的PBS 250μL,。對于大于250μL的樣品，每個樣品拆分成兩個取250μL,，并使用1.2 mL圓底孔板溶解的兩口井,。到96孔DNA板的各孔中裝入合并的溶胞產(chǎn)物。

儲存的血液樣本

沒有以前的治療的血液樣本的存儲導(dǎo)致產(chǎn)量減少的基因組DNA,。的結(jié)果,，血標(biāo)本應(yīng)作如下處理，

l對于短期存儲（一個星期）,，在含有EDTA抗凝管收集血液,，并儲存于4°C。

l對于長期儲存,，收集管中的血液中含有一種抗凝血劑,，并儲存在-70°C。解凍冷凍血液樣本,，在37°C,，使用前輕輕攪拌。

EZgene ^TM 96 - 井血液DNA協(xié)議

1,。免除25 μL 蛋白酶K（20 毫克/毫升）,，每孔1.2 mL圓底孔板的底部。每個樣品標(biāo)記的位置,。

2,。井的內(nèi)部，而不接觸輪輞與前端部（zui多6 x 10 ⁶淋巴細胞或培養(yǎng)的細胞在PBS中可以通過觸摸到圓形孔深孔板的各孔中添加250μL的全 血,，血清或體液各孔中使用）,。

注：樣品體積小于或大于250μL，調(diào)整樣品體積250μL PBS（開始之前第4頁上的詳細信息,，請參閱“）,。

3。每個樣品中加入250μL緩沖液BL,。避免接觸的輪輞井的提示,，這可能會導(dǎo)致交叉污染。可選：添加5μL的核糖核酸酶A每口井每250μL 緩沖液BL,。添加緩沖BL /核糖核酸酶A組合,，以每口井。

4,。密封圓形孔板上限（提供）*混合樣品,，振蕩30秒或用力搖動板（邊到邊）。

注意：搖動機架一側(cè)到另一側(cè),。為了防止可能出現(xiàn)的泄漏周圍微管帽,，不搖板和失望,。

5。在2000 XG短暫離心收集任何樣本,，帽子,。

6。孵育樣品在65℃的培養(yǎng)箱中或烤箱10分鐘,。混合孵化過程中偶爾輕輕地旋轉(zhuǎn)板,。

注意：切勿劇烈振蕩的樣品超過20分鐘。

7,。在2000年XG短暫離心收集任何解決方案,，從帽。取出微管帽,。向每孔中加入2 6 0μL 的無水乙醇（96-100％） ,。

8。密封圓形孔板使用新上限（提供）,。

9,。將樣品混合，通過渦旋或用力搖動1分鐘的板（從一側(cè)到另一側(cè)）,。在2000年XG短暫離心收集任何液體的上限,。

10。將DNA板頂部的2毫升96孔收集板（提供）,。馬克的96孔DNA板,，以便后面識別。

11,。傳輸從步驟10到96孔DNA板的各孔中的所有樣品,。

12。用密封膜密封的96孔DNA板,。離心在5000 XG 5-10分鐘,。確保所有的樣品已通過膜的DNA板的各孔中。

13,。丟棄流過的96孔收集板,。刪除的粘合膜的蓋子，然后在各孔中添加400μL緩沖液KB,。

14。密封板與新的密封膜,，并在5000×g離心5分鐘,，然后離心處理，以使板,。丟棄流過的96孔收集板,。

15,。取出的密封膜的蓋子，然后在各孔中添加700μLDNA洗滌緩沖液,。

注：即DNA洗滌緩沖液濃縮物和被提供作為瓶或第4頁上所示,，必須用無水乙醇稀釋。如果是冷藏保存,，稀釋的洗滌緩沖液必須冷卻至室溫后再使用,。

16。密封板與新的密封膜,，并在3000-5000 xg離心5分鐘,，然后離心處理，以使板,。丟棄的流量,，通過在96孔收集板。

17,。卸下粘接膜蓋和在各孔中添加600μLDNA洗滌緩沖液,。將DNA的2毫升收集板的頂部板96孔，96孔DNA板密封與 ??一個新的密封膜和離心機在馬克西速度（5,000 xg離心）10分鐘,。

18,。取出的密封膜，并在真空烘箱中或在70℃的培養(yǎng)箱預(yù)置為8分鐘,，干燥膜孵育96孔DNA板,。

注意：這些干燥步驟用于除去的微量乙醇，否則可能會干擾與下游應(yīng)用是至關(guān)重要的,。

19,。將96孔DNA板之上的新的安裝機架的微管（附帶）。添加200μL洗脫緩沖液在65℃下預(yù)熱96孔DNA板的各孔中,。兩到四分鐘,，在室溫下孵育，或在孵化器設(shè)定在65℃的一到兩分鐘,。

20,。與一個新的密封膜密封96孔DNA板和離心處理，以使板在5,000 xg離心5分鐘,，以洗脫DNA,。

注： *次洗脫通常會產(chǎn)生60％-70％的DNA綁定到列。另外200μL洗脫緩沖液可以產(chǎn)生另外的20％,。 低于50μL的卷,，大大降低了產(chǎn)量。

96孔板血液gDNA小量提取試劑盒實驗細則

會員登錄

收藏該商鋪

提示