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中級(jí)會(huì)員 | 第16年

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預(yù)染蛋白marker

時(shí)間:2017/9/21閱讀:2448
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    蛋白marker可分為未預(yù)染的Marker即寬分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn),、高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)以及低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)以及預(yù)染的Marker即單色預(yù)染和多色預(yù)染。那么,,什么是預(yù)染蛋白marker,?預(yù)染蛋白marker為一些純化好的蛋白的混合物.這些蛋白混合物與一種藍(lán)色染料共價(jià)偶聯(lián).可在凝膠電泳時(shí)出現(xiàn)強(qiáng)度均勻的8條帶.同未預(yù)染的蛋白marker相比,預(yù)染蛋白marker因與染料共價(jià)偶聯(lián)而在SDS-PAGE電泳時(shí)的遷移特性發(fā)生某些改變.
    預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn):預(yù)染蛋白分子量是一些純化好的蛋白混合物,通過(guò)與染料共價(jià)耦聯(lián),,在電泳過(guò)程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以直接觀察到,。預(yù)染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了我們的實(shí)驗(yàn),這種蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)可以幫助我們?cè)陔娪緯r(shí),、電泳后,,以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測(cè)電泳情況和估計(jì)遷移率   比如,已知垂直電泳*分辨區(qū)域大約在膠的2/3處,,如果使用預(yù)染蛋白Marker就可以預(yù)測(cè)目標(biāo)蛋白進(jìn)入*分辨區(qū)時(shí)停止電泳以得到*分辨效果,,如果觀察到Marker電泳異常也可以及時(shí)終止電泳,另外在Western Blot轉(zhuǎn)膜以后可以直接觀察蛋白轉(zhuǎn)膜是否*,,還可以在膜上標(biāo)記蛋白分子量,,所以吸引了許多實(shí)驗(yàn)室人員購(gòu)買預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)。值得注意的是預(yù)染蛋白Marker與染料共價(jià)耦聯(lián),,所以在不同的緩沖條件下電泳時(shí)遷移特性可能會(huì)發(fā)生某些變化,,可能導(dǎo)致一些偏差,所以不太適合定位蛋白  不過(guò)多數(shù)情況下Marker的條帶未必能和我們的目標(biāo)蛋白*一樣,,我們得到的也不過(guò)是一種相對(duì)Marker指示的參考大小,,zui后都需要Western來(lái)定性,所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶,,預(yù)染Marker還是很好用的,,而且也可以和未染色的蛋白標(biāo)準(zhǔn)一起使用。
    預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)可以分為兩種:?jiǎn)紊A(yù)染和多色預(yù)染,,其實(shí)區(qū)別就在于幫助在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中辨認(rèn)某個(gè)條帶的大小—Marker條帶越多參考價(jià)值越大,,可就越難辨認(rèn)區(qū)分,如果用不同的顏色來(lái)區(qū)別就比較好辨認(rèn)。單色的Marker通常是利用其中某些條帶加倍濃度來(lái)提示其大小的,。還有一點(diǎn)特別要注意,由于轉(zhuǎn)膜是一個(gè)將膠里的Marker濃縮在潔白的膜上,,所以需要的上樣量相對(duì)少一些,,如果想要在電泳過(guò)程中看到美麗的“彩虹”,或者單色的Marker往往需要比說(shuō)明書(shū)里多加一些Marker的,。
非和有什么區(qū)別
    非電泳時(shí)看不到條帶,,染色后才能看到,而會(huì)有特定的某些蛋白條帶帶有顏色,,電泳過(guò)程中可以觀察到,,還有在WB過(guò)程中也起到轉(zhuǎn)膜是否成功的指示作用。
    預(yù)染的marker的分子量在不同濃度膠上跑出來(lái)是不一樣的,,這個(gè)叫表觀分子量,。未預(yù)染的marker是zui準(zhǔn)確的,如果只做wb,,預(yù)染的marker就夠了,,每次都能觀察轉(zhuǎn)膜情況。
    其他都是些細(xì)節(jié)上的區(qū)別,,比如有些會(huì)做成彩虹色的,,以便區(qū)別分子量大小有些的條帶比較多等等。

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