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1. 存放血清的方法
血清一般保存在-20℃以下,。若存放于4℃時,,請勿超過半個月,。若一次無法用完一瓶,,建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),,再放回冷凍。
2.如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損
建議您將血清從冷凍箱取出后,,先置于2~8℃冰箱使之融解,,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,,溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻,。
3.血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,,但zui普遍地原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,,而血纖素蛋白(形成凝血地蛋白之一)在血清解凍后,,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,,并不影響血清本身的質(zhì)量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),,稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。我們不建議你以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,,因為它可能會阻塞您的過濾膜。
4.如何避免沉淀物的生產(chǎn)
我們建議您在使用血清的時候,,注意下列的操作:
⑴ 解凍血清時,,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),,實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。
⑵ 解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,,使溫度及成分均一,,減少沉淀的發(fā)生。
⑶ 請勿將血清置于37℃太久,。若在37℃放置太久,,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,,而影響血清的質(zhì)量,。
⑷ 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,,可以無須做此步驟。
⑸ 若必須做血清的熱滅活,,請遵守56℃,,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻,。溫度過高,、時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多,。
5.為什么要熱滅活血清
加熱可以滅活補體系統(tǒng),。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,,細胞和血小板釋放組胺,,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細胞,,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,,推薦使用熱滅活血清。
6.有必要做熱滅活嗎
實驗顯示,,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的 。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,,或*沒有任何作用,,甚至通常因為高溫處理影響了血清的活性,而造成細胞生長速度的降低,。而經(jīng)過熱處理的血清,,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,,像是“小黑點”,,常常會讓研究者誤以為是微生物的分裂擴增。
因此我們建議您,,若非必須,,您可以不需要做熱處理這一步。如此以來,,不但節(jié)省你寶貴的時間,,更確保血清的質(zhì)量。
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