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基礎(chǔ)培養(yǎng)基說明

時間:2016/8/29閱讀:2024
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基礎(chǔ)培養(yǎng)基

絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎(chǔ)上,,添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì),。zui廣泛應(yīng)用的培養(yǎng)基是Eearle`s MEM 的混合物,,其中含有13種必須氨基酸、8種維生素,。而Ham`s F12 也包括非必須氨基酸,,維生素的范圍亦很廣,另外常規(guī)含有無機(jī)鹽和代謝添加劑(例如核苷酸),。MEM/F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2,,形成神經(jīng)生物學(xué)zui通用的培養(yǎng)基。Dulbecco`s改良培養(yǎng)基——DMEM,,現(xiàn)應(yīng)用于快速生長的細(xì)胞,,同MEM含有相同的營養(yǎng)成分,但濃度高出2~4倍,。選擇某種培養(yǎng)基,,應(yīng)仔細(xì)了解成分表,應(yīng)知道大多數(shù)情形下培養(yǎng)基都有不足,。例如,,有些培養(yǎng)基在氨基酸中包括有谷氨酸,,而這種培養(yǎng)基雖廣泛用于神經(jīng)生物學(xué)領(lǐng)域,,但它對某些對谷氨酸敏感的可能有細(xì)胞外毒性損傷的神經(jīng)元而言,則并非*選擇,,特別是如果神經(jīng)元生長在缺乏膠質(zhì)的環(huán)境中時,。F12中含有硫酸亞鐵,據(jù)報道也有神經(jīng)毒效應(yīng),。

在所有這些培養(yǎng)基中,,谷氨酸比其他氨基酸有更高的濃度,這是因?yàn)樗哂胁环€(wěn)定性以及在許多細(xì)胞培養(yǎng)中它常用作碳源,。對于神經(jīng)元的培養(yǎng)常常在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸(若培養(yǎng)基中這兩種物質(zhì)缺乏時),。MEM與F12均要用5%的CO2來平衡,,DMEM含更高濃度的NaCO3,要用10%的CO2來平衡,,當(dāng)然也可以在較低CO2濃度下使用,。這些基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組成成分是建立在對不同細(xì)胞系生長的研究之上的,但通常在原代培養(yǎng)中使用也能有比較令人滿意的結(jié)果,。

原則上,,HEPES作為緩沖劑可用來代替碳酸氫鹽,以解除需要高濃度CO2培養(yǎng)環(huán)境的限制,。實(shí)際操作中并非如此簡單,。顯然,溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細(xì)胞生長是重要的,。Leiboviz`sL15培養(yǎng)基可用來在大氣環(huán)境中令神經(jīng)細(xì)胞生長,,該培養(yǎng)基采用了與眾不同的BSS作基礎(chǔ),它含有高濃度的氨基酸來提高緩沖能力,,培養(yǎng)基中使用半乳糖作碳源,,以阻止培養(yǎng)基中乳酸形成,少量溶解的CO2由丙酮酸代謝產(chǎn)生,。這一培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)是明顯的,,特別是在保持較高CO2有困難時,例如在長時間的顯微操作及生理學(xué)研究中,。L15培養(yǎng)基已用來成功的培養(yǎng)了外周神經(jīng)元,,但尚未在CNS神經(jīng)元的發(fā)育研究中全面檢測過。

 

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