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北京西美杰科技有限公司
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如何用正確的洗板方法解決ELISA檢測(cè)結(jié)果漂移的問(wèn)題
2024-9-18 閱讀(434)
正確的洗板操作對(duì)于降低ELISA實(shí)驗(yàn)中的變異和消除背景干擾至關(guān)重要,。如果您正在使用自動(dòng)化洗板設(shè)備或?qū)嶒?yàn)結(jié)果的變異程度高于預(yù)期，希望以下文章和視頻能幫助您優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程,，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果回歸正常,。
手動(dòng)洗板的優(yōu)點(diǎn)
雖然ELISA洗板的目的是去除未結(jié)合的反應(yīng)物，但過(guò)度洗板會(huì)不同程度上導(dǎo)致抗體與目標(biāo)蛋白解離,，從而導(dǎo)致吸光值偏低和%CV值偏高,。此外，殘留液體去除不完全（通常發(fā)生在自動(dòng)洗板設(shè)備中）也會(huì)導(dǎo)致更高的檢測(cè)背景,，這些對(duì)HCP ELISAs檢測(cè)尤為不利,，因?yàn)槠浔旧砭途哂休^高的基線吸光值。
因此,，Cygnus專家建議在使用Cygnus ELISA試劑盒時(shí)盡量采用手動(dòng)洗板的方法,。該方法簡(jiǎn)便易學(xué)，無(wú)需任何特殊設(shè)備,。只要準(zhǔn)備一些低纖維吸水紙和一個(gè)洗瓶就可輕松操作,，需要注意的是洗瓶的出水口要修剪成大開(kāi)口斜面以確保洗液的充分流動(dòng)與合適的沖洗力度。
修剪洗瓶出水口
準(zhǔn)備工作：稀釋洗滌液并準(zhǔn)備好洗板操作區(qū)域
用蒸餾水將20×的濃縮洗滌液稀釋至1×洗滌液裝入洗瓶?jī)?nèi),，將吸水紙鋪開(kāi)放在水槽旁邊干凈的工作臺(tái)上,。
注：請(qǐng)勿使用除ELISA試劑盒提供之外的其他洗滌液，這樣可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
第一步：倒出ELISA孔板內(nèi)的液體
用拇指按住ELISA板一側(cè)的中間位置,，用食指按住另一側(cè)，從底部托起ELISA板,。可以用拇指和食指扣住孔板條或板條兩端的標(biāo)簽,，以避免板條從板托中掉出,。在水槽上方迅速翻轉(zhuǎn)孔板，借助手臂的力量快速向下移動(dòng)并突然停止,，動(dòng)作要連貫,，讓液體借助慣性從孔板內(nèi)甩入水槽。在操作正確的情況下，手指,、孔板條和板托外側(cè)不應(yīng)沾上任何液體,。然后重復(fù)這個(gè)傾倒動(dòng)作一次。
注：如果擔(dān)心孔板條從板托中掉出,，可以在每個(gè)孔板條上提前標(biāo)注好位置,。
第二步：用吸水紙吸干殘留液體，然后輕輕拍板
立即將倒扣的孔板按壓在吸水紙上,，并將孔板移至吸水紙未使用的區(qū)域,，輕輕拍板三次，每一次拍板都要在吸水紙未使用的區(qū)域,。不要用力拍板,，如果拍板力度過(guò)大會(huì)在板上傳遞不均勻的沖擊能量，致使抗體/分析物復(fù)合物的解離,。
第三步：清洗孔板
用裝有1×洗滌液的洗瓶,，從板的上邊一側(cè)開(kāi)始，將洗滌液逐個(gè)填滿所有孔到溢出,，直至最后一個(gè)孔,，然后再按照步驟1和2的方法丟棄洗滌液并輕輕拍板。
注：不用擔(dān)心洗滌液從孔內(nèi)溢出,，但要避免洗滌液在孔內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間浸泡,。
重復(fù)上述步驟3次，總共進(jìn)行4次洗板操作,。需要注意的是,，在第2次和第4次洗板時(shí)，要從板的下邊一側(cè)反方向逐孔加入洗滌液,。這樣操作可以確保所有孔的洗滌液總浸泡時(shí)間基本相同,。另外，無(wú)需額外增加洗板次數(shù),，這樣可能會(huì)使結(jié)合在抗體上的分析物解離,，導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度降低。
最后一次洗板后,，還是按照步驟1和2所述的方法吸干/輕拍吸水紙,。然后將ELISA板倒扣在吸水紙上靜置約20秒，以便徹底排干殘留液體,，最后再在吸水紙上拍板4次,。
注：每次拍板后，孔板最好能在手中水平旋轉(zhuǎn)180度,，這樣可以確保板兩端的受力更加均勻,。
第四步：擦干多余液體
用干凈的吸水紙擦拭孔板的底部外部,，清除殘留的洗滌液。最后將洗好的ELISA板放回到實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)并加入底物,。
注：不要讓孔板徹底晾干,，否則酶的活性將會(huì)受到影響,。底物要遠(yuǎn)離水槽,，因?yàn)橄窗暹^(guò)程可能會(huì)產(chǎn)生氣溶膠,，導(dǎo)致孔板或者底物被污染，影響檢測(cè)結(jié)果,。
Cygnus Technologies, LLC.為生物技術(shù)和生物制藥行業(yè)提供產(chǎn)品和分析方法,，旨在加速研發(fā)階段和提高產(chǎn)品質(zhì)量。Cygnus開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)的生物工藝殘留試劑盒,，用于檢測(cè)超過(guò)50種不同表達(dá)系統(tǒng)的特異性雜質(zhì),。Cygnus作為專注于生物技術(shù)應(yīng)用免疫檢測(cè)的高靈敏度分析技術(shù)的專家，Cygnus的產(chǎn)品和服務(wù)已經(jīng)被幾乎所有主要的生物制藥公司使用超過(guò)25年,。
北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國(guó)總代理,，與國(guó)內(nèi)眾多藥企，CRO/CMO企業(yè)建立了長(zhǎng)久穩(wěn)定的合作關(guān)系,。多年來(lái)西美杰的產(chǎn)品及服務(wù)幫助許多企業(yè)加速R&D階段,，提高藥物質(zhì)量、純度和安全,，加速優(yōu)化研發(fā)工藝,，減少產(chǎn)品上市時(shí)間，降低QC成本,。
