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本產(chǎn)品僅用于科研,，不用于臨床

牛泰勒蟲抗體（Theileria）ELISA試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
使用目的：本試劑盒用于測定牛血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中泰勒蟲?。╰heileriasis）的表達。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中牛泰勒蟲?。╰heileriasis）表達,。用純化的牛泰勒蟲病

（theileriasis）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，可與樣品中泰勒蟲?。╰heileriasis）相結(jié)合，經(jīng)

洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的泰勒蟲?。╰heileriasis）抗體結(jié)合,，形成

抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下

轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD

值）,，與 CUTOFF 值相比較,，從而判定標(biāo)本中牛泰勒蟲病（theileriasis）的存在與否,。

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能

馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1.編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔,、陽性對照 2 孔,、空白對照 1

孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先

加樣品稀釋液 40µl,，然后再加待測樣品 10µl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不

觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此

重復(fù) 5 次，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3,。

8.洗滌：操作同 5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)）,。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進行,。

計算和結(jié)果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為泰勒蟲?。╰heileriasis）陰性

陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為泰勒蟲病（theileriasis）陽性

,。

牛泰勒蟲抗體（Theileria）ELISA試劑盒
英文名稱：Cattle Theileria antibody ELISA kit

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T
注意事項

1．操作嚴(yán)格按照說明書進行,，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

5．底物請避光保存,。

6．試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時,，參考波長為 630nm

7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,，使用時必須

注意安全,。

牛泰勒蟲抗體（Theileria）ELISA試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6 個月