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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司資料大小
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1680次本試劑盒僅供研究使用:
檢測范圍:96T
0.3 ng/L -18 ng/L
使用目的:
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中甲肝抗體IgM(HAV IgM)含量,。
小鼠甲肝抗體IgM(HAV IgM)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中小鼠甲肝抗體IgM(HAV IgM)水平,。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,,往包被單抗的微孔中依次加入甲肝抗體IgM(HAV IgM),,再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的,。顏色的深淺和樣品中的甲肝抗體IgM(HAV IgM)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠甲肝抗體IgM(HAV IgM)濃度。
試劑盒組成:
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 |
3 | 標(biāo)包被板 | 12孔×8條 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 |
5 | 顯色劑 A液 | 6ml×1瓶 |
6 | 顯色劑 B液 | 6ml×1瓶 |
7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
8 | 標(biāo)準(zhǔn)品(4000 pg/ml) | 0.5ml×1瓶 |
9 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
10 | 說明書 | 1份 |
11 | 封板膜 | 2張 |
12 | 密封袋 | 1個(gè) |
標(biāo)本要求:
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟:
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
16 ng/L | 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 15041的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入1501標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
8 ng/L | 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150u1的5號(hào) 標(biāo)準(zhǔn)品加入150u1 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
4 ng/L | 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 15041的4號(hào) 標(biāo)準(zhǔn)品加入15041 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2 ng/L | 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 15041的3號(hào) 標(biāo)準(zhǔn)品加入150m1 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
1 ng/L | 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150u1的2號(hào) 標(biāo)準(zhǔn)品加入150u1 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5,。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色10分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
11.測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
操作程序總結(jié):
計(jì)算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),,在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),,即為樣品的實(shí)際濃度。
小鼠甲肝抗體IgM(HAV IgM)ELISA試劑盒注意事項(xiàng):
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好控制在5分鐘內(nèi),,如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣。
4.請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,,好做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,,計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:2-8℃,。
2.有效期:6個(gè)月
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請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
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