牛C反應(yīng) (CRP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

檢測(cè)范圍：96T

35µg/L -1000µg/L

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定牛血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中 C反應(yīng)（CRP）含量,。

實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中牛 C  反應(yīng)（CRP）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入  C  反應(yīng)白（CRP），再與 HRP標(biāo)記的  C反應(yīng)    （CRP）抗體    ,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。TMB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的,。顏色的深淺和樣品中的  C 反應(yīng)    （CRP）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀（CRP）    ,。用純化的牛 C  反應(yīng)在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中牛   C反應(yīng)

（CRP）濃度。

試劑盒組成：

標(biāo)本要：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因   NaN3抑制辣根過（HRP）活性,。

牛C反應(yīng) (CRP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟：

1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。

2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再待測(cè)樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后37℃溫育30分鐘,。

4.配液：將 30倍濃30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜30秒后棄去,，如此重復(fù) 5次,，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,，空白孔除外,。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.

10.終止：每孔加終止液    50µl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）,。

11.測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）,。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

操作程序總：

計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),， OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度,。

牛C反應(yīng) (CRP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項(xiàng)：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會(huì)有析出，稀釋時(shí)可在浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間

控制在 5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本  OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔di一孔的 OD值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉,。

6．底物請(qǐng)避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn).

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

保存條件及有效期：

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個(gè)月