牛玻連(VN)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。

檢測范圍：96T
15pg/ml-400pg/ml

使用目的：
本試劑盒用于測定牛血清,、血漿及相關液體樣本中玻連(VN)含量,。

實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛玻連(VN),。用純化的牛玻連(VN)抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入玻連(VN),，再與  HRP,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過洗滌后加底物TMB 顯色,。TMB 在 HRP  酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的。顏(VN)呈正相關,。用酶標儀在  450nm 波長下測定吸光度（OD標記的玻連(VN)抗體色的深淺和樣品中的玻連值）,，通過標準曲線計算樣品中牛玻連(VN)濃度。

試劑盒組成

標本要

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過（HRP）活性,。

牛玻連(VN)酶聯免疫分析試劑盒操作步驟

1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后37℃溫育30分鐘,。

4.配液：將 30倍濃30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜30秒后棄去,，如此重復 5次,，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外,。

7.溫育：操作同 3,。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10.終止：每孔加終止液    50µl,，終止反應（此時藍色立轉）,。

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行,。

操作程序總：

牛玻連(VN)酶聯免疫分析試劑盒計算
以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標,，在坐標紙上,，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數,；或用標準物的濃度與  OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數,，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有析出,，稀釋時可在浴中加溫助溶，洗滌時不影響,。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差,。如標本數量多,，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線,，如標本中待測物質含量過高（樣本  OD值大于標準品孔di一孔的 OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）,。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉,。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個月