雞蛋卵黃高磷蛋白磷酸肽(PPP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

檢測范圍：96T

20pg/ml-500pg/ml

使用目的：

本試劑盒用于測定血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中雞蛋卵黃高磷蛋白磷酸肽(PPP)含量,。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中雞蛋卵黃高磷蛋白磷酸肽 (PPP)水平,。用純化的雞蛋卵黃高磷蛋白磷酸肽(PPP)抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入雞蛋卵黃高磷蛋白磷酸肽(PPP)，再與  HRP 標記的雞蛋卵黃高磷蛋白磷酸肽(PPP)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物  TMB 顯色。TMB 在  HRP

酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的,。顏色的深淺和樣品中的雞蛋卵黃高磷蛋白磷酸肽(PPP)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中雞蛋卵黃高磷蛋白磷酸肽(PPP)濃度,。

試劑盒組成

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

雞蛋卵黃高磷蛋白磷酸肽(PPP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,，然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30秒后棄去,，如此重復(fù) 5次，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl,，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3,。

8.洗滌：操作同 5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液    50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)）,。

11.測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：

計算

以標準物的濃度為橫坐標,， OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與  OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間好控制在 5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標準曲線,，好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本  OD值大于標準品孔孔的 OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

10.如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。

雞蛋卵黃高磷蛋白磷酸肽(PPP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個月