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大鼠仙臺(tái)病毒(HVJ)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

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本試劑盒僅供研究使用。
96T

大鼠仙臺(tái)病毒(HVJ)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中仙臺(tái)病毒(HVJ)表達(dá),。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠仙臺(tái)病毒(HVJ)表達(dá)。用純化的大鼠仙臺(tái)病毒(HVJ)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,可與樣品中仙臺(tái)病毒(HVJ)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的仙臺(tái)病毒(HVJ)抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的,。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,,從而判定標(biāo)本中大鼠仙臺(tái)病毒(HVJ)的存在與否,。
試劑盒組成 

標(biāo)本要求 
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性,。
大鼠仙臺(tái)病毒(HVJ)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔,、陽(yáng)性對(duì)照2孔,、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)


2.加樣:分別在陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測(cè)樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻,,
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外。 
7.溫育:操作同3,。
8.洗滌:操作同5,。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色10分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)),。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。


操作程序總結(jié):


計(jì)算和結(jié)果判定:
  試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
  臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
  陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為仙臺(tái)病毒(HVJ)陰性
  陽(yáng)性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為仙臺(tái)病毒(HVJ)陽(yáng)性
,。 
注意事項(xiàng)
1.操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4.封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
5.底物請(qǐng)避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),,使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),,參考波長(zhǎng)為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸,,使用時(shí)必須注意安全。
大鼠仙臺(tái)病毒(HVJ)酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期
1.試劑盒保存:,;2-8℃,。
2.有效期:6個(gè)月

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