大鼠血管緊張素1-9 （Angiotensin 1-9）

  本試劑盒僅供研究使用      標(biāo)本：組織勻漿

一,、試 劑 組 成

二、注意事項(xiàng)

1.  此試劑為體外檢測試劑,，效期內(nèi)使用，試劑應(yīng)視為傳染物,，不同總批號的試劑不能混用,。

2．  使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出。室溫放置至少30分鐘,，

3．  濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后,，請于37℃孵育15分鐘。

4．  濃縮樣品稀釋液出現(xiàn)結(jié)晶后,，請于37℃孵育15分鐘

5．  若24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),，標(biāo)本可存放于2～8℃。不需及時(shí)實(shí)驗(yàn),，標(biāo)本-20℃保存,，避免反復(fù)凍融。

6．  在反復(fù)清洗微孔板,，并扣干微孔中的殘余液體,，否則將降低度，造成吸光度偏離的假像,。

7．  加樣完畢后,，應(yīng)注意輕微搖動微孔反應(yīng)條，以便使孔中的液體充分混勻,。

8．  試劑盒保存于2～8℃,，請勿冷凍，有效期請見盒內(nèi)標(biāo)示,。

三,、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1．使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出，室溫放置至少30分鐘,。

2．準(zhǔn)備各種實(shí)驗(yàn)儀器及材料,，如微量移液器，吸頭,，醫(yī)用蒸餾水等

3．濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1︰19倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液

4．濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1︰4倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液

5．用應(yīng)用樣品稀釋液來稀釋樣品,，按照1：100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中，充分混勻待用,。）

四,、操 作 步 驟

1．取出酶標(biāo)板，設(shè)空白孔，依照次序?qū)?yīng)分別加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)品于空白微孔中（空白孔視為0號標(biāo)準(zhǔn)品,，用醫(yī)用蒸餾水替代）

2,、分別標(biāo)記樣品編號，加入100μl的稀釋樣品于空白微孔中（不同的樣本采用不同的吸頭）,。

3,、將酶標(biāo)板置于37℃溫育30分鐘；

4,、將酶標(biāo)板板取出,，將其中的液體甩去，每個(gè)孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,，立即甩去液體;

5,、每個(gè)孔中加滿應(yīng)用洗滌液后,，輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

6,、重復(fù)第5個(gè)步驟5次,，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

7,、在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中加入100μl的酶標(biāo)偶合溶液,。

8、將96孔板置于37℃溫育30分鐘,。

9,、將酶標(biāo)板取出，將其中的液體甩去,，每個(gè)孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,，立即甩去液體。

10,、每個(gè)孔中再次加滿洗滌應(yīng)用液后,，室溫輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干,。

11,、重復(fù)第5個(gè)步驟5次，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干,。

12,、在每個(gè)孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。輕輕振蕩混勻,。（A液,、B液采用不同的吸頭加樣）

13、將酶標(biāo)板置于37℃避光溫育反應(yīng)15分鐘。

14,、每個(gè)微孔中加入50μl的終止液,，輕輕振蕩混勻。

15,、在酶標(biāo)儀上,，450nm處測定OD; 顯色后，15分鐘內(nèi)進(jìn)行測定,。

16,、根據(jù)制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本含量

五,、結(jié) 果 判 斷

1. 儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值,；

2、檢測值范圍：0－800pmol/L

3,、敏感度：1.0pmol/L