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大鼠黃體生成素(LH) ELISA 檢測試劑盒說明書

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大鼠黃體生成素(LH) ELISA 檢測試劑盒

本試劑僅供研究使用  標本:血清或血漿

 

 

試驗原理

LH試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA.已知LH濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測,。先將LH和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,,加入親和素標記過的HRP,。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,,然后加入底物A,、B,和酶結合物同時作用,。產生顏色,。顏色的深淺和樣品中LH的濃度呈比例關系,。

 

試劑盒內容及其配制:

試劑盒成份

96孔配置

48孔配置

96/48人份酶標板

1塊板(96T

半塊(48T

塑料膜板蓋

1

半塊

標準品:80mIU/ml

1瓶(1.0ml

1瓶(0.5ml

空白對照

1瓶(1.0ml

1瓶(0.5ml

標準品稀釋緩沖液

1瓶(8.0ml

1瓶(4.0ml

生物素標記的抗LH抗體

1瓶(8.0ml

1瓶(4.0ml

親和鏈酶素-HRP

1瓶(12ml

1瓶(6.0ml

洗滌緩沖液

1瓶(20ml

1瓶(10ml

底物A

1瓶(6.0ml

1瓶(3.0ml

底物B

1瓶(6.0ml

1瓶(3.0ml

終止液

1瓶(6.0ml

1瓶(3.0ml

 

自備材料:

 

1.   蒸餾水,。

2.   加樣器:5ul,、10ul,、50ul100ul,、200500ul,、1000ul,。

3.   振蕩器及磁力攪拌器等,。

4.    

樣品收集,、處理及保存方法:

 

1,、   血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管,。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

 

 

 

2、   血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3,、   細胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。

4,、   組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,取上清液

5,、   保存------如果樣品不立即使用,,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

 

操作注意事項:

 

l        試劑應按標簽說明書儲存,,使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,,不可保存,。

l        實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質,。

l        不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質前使用,。

l        使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時,,避免使用帶金屬部分的加樣器,。

l        使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。

l        底物A應揮發(fā),,避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。

l        加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。

l        按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。

 

 

安全性:

 

1.   避免直接接觸終止液和底物AB,。一旦接觸到這些液體,,請盡快用水沖洗。

2.   實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。

3.   不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

 

試劑的準備:

 

1.   標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻,。稀釋比例按下表中進行:

80

 mIU/ml

6號標準品)

原倍濃度不用稀釋直接加入50ul,。

40

mIU/ml

5號標準品)

100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液

20

mIU/ml

4號標準品)

100ul5號標準品加入100ul的標準品稀釋液

10

mIU/ml

3號標準品)

100ul4號標準品加入100ul的標準品稀釋液

5.0

mIU/ml

2號標準品)

100ul3號標準品加入100ul的標準品稀釋液

2.5 mIU/ml

1號標準品)

100ul2號標準品加入100ul的標準品稀釋液

0 mIU/ml

(空白對照)

原始濃度不用稀釋直接加入50ul,。

 

2.   洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

 

試劑盒性能:

 

1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990,。

2. 特異性:不與其它細胞因子反應。

3. 重復性:板內,、板間變異系數均小于10%

 

 

 

 

操作步驟:

 

1.   使用前,,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產生大量的泡沫,,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差,。

2.   根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔,。

3.   加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內,。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育45分鐘,。

4.   甩去孔內液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干。重復此操作4次,。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數增加一次,。

5.   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘。

6.   甩去孔內液體,,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復此操作4次,。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數增加一次,。

7.   每孔加入底物A,、B50ul,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照,。

8.   取出酶標板,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應立即測定結果。

9.   450nm波長處測定各孔的OD值,。

 

結 果 判 斷 析:

 

1,、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD

2,、以吸光度OD值為縱坐標(Y),,相應的LH標準品濃度為橫坐標(X),,做得相應的曲線,,樣品的LH含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度, 再乘以稀釋倍數,;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度,。

3,、檢測值范圍:0-80mIU/ml

4,、敏感度: 0.1 mIU/ml

 

 

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