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常用染料和試劑的配制與使用

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1. 碘-硫酸法
  植物細胞細胞壁的主要成分是纖維素,纖維素被硫酸水解后,,遇碘呈藍色反應,。因此用碘-硫酸法可鑒定細胞壁的成分。
  試劑配制方法:
  1% 碘液 將1.5 克碘化鉀溶于100 毫升的蒸餾水中,,待*溶解后,,加入1 克碘,震蕩溶解,。
  66.5% 硫酸 7 份濃硫酸加入3 份蒸餾水配制而成,。配制時要將濃硫酸慢慢地加入水中,,并不斷地用玻璃棒攪拌,,否則會因急劇發(fā)熱,而使容器炸裂,。
  2. 蘇丹Ⅲ反應
  蘇丹Ⅲ可將細胞中脂肪,、栓質(zhì)、角質(zhì)染為桔紅色,,因此可用此染料顯示出上述物質(zhì)在細胞中的分布和位置,。
  配制方法:將蘇丹Ⅲ (或蘇丹Ⅳ)染料0.1 克,溶于10 毫升95% 酒精中,,然后加入10 毫升甘油,。
  3. 間苯三酚反應法
  間苯三酚反應是植物顯微化學中確定木質(zhì)化細胞壁的zui常用和zui簡單的方法。這一反應的原理是當間苯三酚在酸性環(huán)境下與細胞壁中的木質(zhì)素相遇時,,發(fā)生櫻桃紅色或紫紅色反應,。其方法是將要鑒定的切片先用一滴1mol/L
  鹽酸浸透(間苯三酚要在酸性環(huán)境下才能與木質(zhì)素起作用),然后滴一滴5-10% 間苯三酚的85% 酒精溶液,,木質(zhì)化的細胞壁即發(fā)生顏色反應,。
  4.碘液測試淀粉法
  淀粉遇碘呈藍色反應,它是鑒定淀粉的zui常用方法,。
  碘液配制方法:將2 克碘化鉀放入5 毫升蒸餾水中,,加熱使其*溶解;然后加入1克碘,,*溶解后用蒸餾水稀釋至300
  毫升,,放入具有毛玻璃塞的棕色玻璃瓶中,置于暗處保存。
  測定淀粉時,,可將上述溶液稀釋2-10 倍,,使染色不致過深,效果更好,。
  5. 壓片法常用的染料
  (1) 醋酸洋紅 為壓片法中zui常用的染料,。
  配制方法是:先將100 毫升45% 醋酸水溶液放于燒瓶中煮沸,移去火焰,,停止加熱,。然后緩慢加入1 克洋紅粉末,全部加入后再煮沸1-2
  分鐘,。此時可將一枚生銹鐵釘用棉線懸入溶液中約1 分鐘后取出(鐵為媒染劑),。靜置12 小時后經(jīng)過過濾,放入磨口玻璃塞棕色瓶中保存?zhèn)溆谩?br />  (2) 石炭酸---品紅 為近年創(chuàng)用的一種優(yōu)良核染色劑,,將細胞核和染色體染為紅紫色,,細胞質(zhì)一般不著色,背景清晰,。
  其配制方法有二:
  配方Ⅰ:
  原液A:取3 克堿性品紅溶于100 毫升的70%酒精中(此液體可長期保存),。
  原液B:取10 毫升原液A,加入90 毫升5% 的石炭酸(酚)水溶液中(可保存兩周),。
  染色液:取55 毫升原液B 加6 毫升冰醋酸和6 毫升37% 甲醛,。
  此染色液因含有較多的甲醛,可使原生質(zhì)體硬化,,而能保持其固有的形態(tài),。但也因此不易使組織軟化,因而不太適用于植物組織的染色體壓片染色(本染色液適于植物原生質(zhì)體培養(yǎng)中使用),。在此基礎(chǔ)上加以改進的配方Ⅱ,,則可普遍地用于一般植物組織的染色體壓片的染色。
  配方Ⅱ:
  取配方Ⅰ中的染色液20 毫或加80 毫升45% 醋酸和1.8 克山梨醇,。
  染色液配制后為淡品紅色,,如立即使用染色較淺。放置2 周后,,染色能力顯著增強,,而且放置時間越久,染色效果越好,。
  6.鉻酸-硝酸離析法
  為了觀察一個細胞完整的立體形態(tài)結(jié)構(gòu),,可以用一些化學藥品把細壁中的中層物質(zhì)(果膠質(zhì))溶解,使細胞分離散開,,便于觀察,。
  離析前先把材料洗凈,,用刀切成1-2 毫米寬的狹條(如葉片)或切成火柴棍粗細的長約1
  厘米的小條(如根或莖)。然后把切好的材料放進小玻璃瓶中,,加入離析液(加入量約為材料的20 倍),,塞緊瓶塞,放于30-40℃
  溫箱中,。浸漬時間因材料性質(zhì)而異,,葉片和幼嫩的根莖組織3-4
  小時即可,而有些次生結(jié)構(gòu)(如木質(zhì)部)則需要更長的時間,。離析情況應隨時檢查,,檢查的方法是取少許離析材料,放在載玻片上,,加一滴水,,蓋上蓋玻片,然后用解剖針輕輕敲打,,如果材料分離則表明浸漬時間已夠,。浸漬時間超過一天以上時,應更換離
  析液一次,。離析時間已夠的材料,,用水洗凈后放入70% 酒精中保存。
  離析液配方:
  10% 鉻酸 1份
  10%硝酸 1 份
  兩種溶液應在使用時才混合,,混合均勻后再使用,。

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