三,、實驗前準備
1．使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出,，室溫放置至少30分鐘,。
2．準備各種實驗儀器及材料,，如微量移液器，吸頭,，醫(yī)用蒸餾水等
3．濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1︰19倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液
4．濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1︰4倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液
5．用應(yīng)用樣品稀釋液來稀釋樣品,，按照1：100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中，充分混勻待用,。）

四,、操 作 步 驟
1．取出酶標板，設(shè)空白孔,，依照次序?qū)?yīng)分別加入100μl的標準品于空白微孔中（空白孔視為0號標準品,，用醫(yī)用蒸餾水替代）
2、分別標記樣品編號,，加入100μl的稀釋樣品于空白微孔中（不同的樣本采用不同的吸頭）,。
3、將酶標板置于37℃溫育30分鐘,；
4,、將酶標板板取出，將其中的液體甩去,，每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,，立即甩去液體;
5、每個孔中加滿應(yīng)用洗滌液后,，輕微振搖酶標板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,，在吸水紙上將酶標板拍干。
6,、重復第5個步驟5次,，在吸水紙上將酶標板拍干。
7,、在標準品孔和樣品孔中加入100μl的酶標偶合溶液,。
8、將96孔板置于37℃溫育30分鐘,。
9,、將酶標板取出,，將其中的液體甩去，每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,，立即甩去液體,。
10、每個孔中再次加滿洗滌應(yīng)用液后,，室溫輕微振搖酶標板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,，在吸水紙上將酶標板拍干。
11,、重復第5個步驟5次,，在吸水紙上將酶標板拍干。
12,、在每個孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl,。輕輕振蕩混勻。（A液,、B液采用不同的吸頭加樣）
13、將酶標板置于37℃避光溫育反應(yīng)15分鐘,。
14,、每個微孔中加入50μl的終止液，輕輕振蕩混勻,。
15,、在酶標儀上，450nm處測定OD; 顯色后,，15分鐘內(nèi)進行測定,。
16、根據(jù)制備的標準曲線,，計算樣本含量