本產(chǎn)品僅供研究使用
【試劑盒名稱】
雞白細胞介素12（IL-12）定量檢測試劑盒（ELISA）
【試劑盒用途】
定量檢測雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細胞介素12（IL-12）的含量,。
【檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標準品、待測樣本加入到預先包被雞白細胞介素12（IL-12）單克隆抗體透明酶標包被板中,，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A,、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物，在酸的作用下變成,，顏色的深淺與樣品中雞白細胞介素12（IL-12）濃度呈正相關(guān),，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標準品和樣品的OD值,，計算樣本中雞白細胞介素12（IL-12）含量,。
【試劑盒組成】
1
 酶標包被板
 12孔×8條
 7
 顯色劑A液
 6mL
 
2
 標準品
 0.3mL×6管
 8
 顯色劑B液
 6mL
 
3
 20倍濃縮洗滌液
 25mL
 9
 終止液
 6mL
 
4
 樣本稀釋液
 6mL
 10
 說明書
 1份
 
5
 特殊稀釋液
 6mL
 11
 封板膜
 2張
 
6
 酶標試劑
 6mL
 12
 密封袋
 1個
 

備注：標準品（1號→6號）濃度依次為：240、120,、60,、30、15,、7.5 ng/L,。
 
【需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
2,、標準規(guī)格酶標儀
3,、精密移液器及一次性吸頭
4、蒸餾水
5,、一次性試管
6,、吸水紙
【操作步驟】
1、準備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復溫平衡30分鐘,。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。
3,、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上,，分別設(shè)置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置,，在標準品孔中加入標準品50μL,；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加,。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5,、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL,，空白對照孔不加,。
7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
8,、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s）,，37℃避光顯色15min,。
10、終止：取出酶標板,，每孔加終止液50μL,，終止反應（顏色由藍色立轉(zhuǎn)）。
11,、測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。
12,、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。
【樣本要求】
1,、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑,。
2,、標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融。
3,、樣本應充分離心,，不得有溶血及顆粒。
【注意事項】
1,、實驗嚴格按照說明書的操作進行,，實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
2,、酶標包被板開封后如未用完,，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3,、建議所有的標準品,、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值,，以減小實驗誤差,。
4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,，計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。
5、本試劑盒定量范圍為7.5-240ng/L,，超過此范圍,，為標準曲線延伸計算所得，不做為準確定量結(jié)果,，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果（7.5-240ng/L范圍內(nèi)）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
6,、若顯色過淺,，可適當延長底物溫育時間。
7、為避免交叉污染,，標準品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣，不得碰到微孔,；不得重復使用封板膜,。
8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號的試劑不得混用,。
9、底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。
 
【操作程序總結(jié)】
 
準備試劑，樣品和標準品
 

加入準備好的樣品和標準品,，37℃反應30分鐘
 
洗板4次,，加入酶標試劑，37℃反應30分鐘
 
洗板4次,，加入顯色液A,、B，37℃顯色15分鐘
 
加入終止液
 
15分鐘之內(nèi)讀OD值
 
計算
 
【檢測范圍】
7.5ng/L - 240ng/L
【規(guī)格】
96人份/盒
【貯藏】
2-8℃,，避光防潮保存,。
【有效期】
6個月