在小鼠ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后,?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育（incubation）,，有人稱之為孵育,，在ELISA中似不恰當(dāng)。
    只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,。這是一個(gè)逐步平衡的過程,，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此,。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育,。 
溫育常采用的溫度有43℃,、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等,。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度,，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立小鼠ELISA試劑盒方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí),，實(shí)驗(yàn)表明,，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá),。為加速反應(yīng),，可提高反應(yīng)的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行,，但不宜采用更高的溫度,。抗原抗體反應(yīng)4℃更為*,，在放射免疫測(cè)定中多使反應(yīng)在冰箱中,，以形成zui多的沉淀。但因所需時(shí)間太長(zhǎng),，在ELISA中一般不予采用,。
    保溫的方式除有的小鼠ELISA試劑盒儀器附有特制的電熱塊外，一般均采用水浴,，可將ELISA板置于水浴箱中,，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度迅速平衡,。為避免蒸發(fā),，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,，此時(shí)可讓反應(yīng)板漂浮在水面上,。若用保溫箱，小鼠ELISA試劑盒板應(yīng)放在濕盒內(nèi),，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,，在盒底墊濕的紗布，zui后將小鼠ELISA試劑盒板放在濕紗布上,。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度,，特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如此。無論是水浴還是濕盒溫育,，反應(yīng)板均不宜疊放,，以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng),，應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20-25℃,，但具體操作時(shí)可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時(shí),，小鼠ELISA試劑盒板只要平置于操作臺(tái)上即可,。應(yīng)注意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。為保證這一點(diǎn),，一個(gè)人操作時(shí),，一次不宜多于兩塊板同時(shí)測(cè)定。