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當(dāng)前位置:研域(上海)化學(xué)試劑有限公司>>技術(shù)文章>>小鼠ELISA試劑盒樣本處理五部曲
小鼠ELISA試劑盒樣本前處理是酶聯(lián)免疫試驗(yàn)中關(guān)鍵的一步,,稍有不慎將導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)滿盤皆輸,,如何安全,,快捷的處理樣本,,樣本處理五部曲助您精彩實(shí)驗(yàn),。
1 均質(zhì)
組織樣本:肉、肝食品類切細(xì),,用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎,,混合均勻。
水產(chǎn)樣本:去除樣品的非食用部分,,食用部分切細(xì),,用均質(zhì)器均漿;原料表面較臟時(shí),需適當(dāng)用蒸餾水清洗,。
蛋類:鮮蛋去殼,蛋黃和蛋白充分混勻,。
水果,、蔬菜類:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,,取食用部分,。
2 振蕩提取
將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中,振蕩,,使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部,,提取待測組分。
2.1振蕩方式:振蕩器上進(jìn)行上下,、往返式振蕩,、手搖式上下振蕩。
2.2 在組織樣本中加入有機(jī)溶劑之間提取時(shí),,應(yīng)邊加邊振蕩,,防止組織凝結(jié)成團(tuán),不利于提取,。
3. 在用有機(jī)溶劑提取過程中,,如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,解決的方法有:①用細(xì)頭輕輕的攪拌,,破壞乳化后,,再重復(fù)離心。②再加入適量的提取劑,,重新振蕩,。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。
4 濃縮
由于凈化過程中引入的溶劑,,可能會(huì)降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析,,需要去除全部有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮?dú)庀麓蹈桑?strong>小鼠ELISA試劑盒再用復(fù)溶液溶解干燥殘留物。
濃縮方式:
氮?dú)獯蹈沙s,、壓縮空氣吹干除雜,。
注意:
1在吹干樣本之前,用甲醇清洗針頭,,防止雜質(zhì)干擾,。
2在吹樣本時(shí),針頭應(yīng)在液面上空,,避免與樣本接觸,,防止產(chǎn)生交叉污染。
3樣本吹干后應(yīng)立即取下,,避免吹的時(shí)間過長,,影響zui終檢測結(jié)果。
4不同的藥物,,吹干后樣本的保質(zhì)期不同,,提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。
5 凈化
經(jīng)過提取的待測組分中通常含有一些會(huì)干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì),。將待測組分與雜質(zhì)分離的過程,,我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的zui常見的凈化是:液液分配法,。
比如:用復(fù)溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷,,在加入正己烷和復(fù)溶液渦動(dòng)后如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,可以60℃水浴加熱,,至乳化現(xiàn)象消失或減弱后,,加大離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心。
溫馨提示Elisa實(shí)驗(yàn)使用注意事項(xiàng):
1,、小鼠ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2,、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,,洗滌時(shí)不影響結(jié)果
3,、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,,以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣,。
4,、請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔OD值的),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
5,、嚴(yán)格按說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
6,、本試劑不同批號組分不得混用,。
7、封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
8、所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9、底物請避光保存,。
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