在小鼠ELISA試劑盒實驗中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的,，其中包括:
（1） 固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體,，如聚氯乙烯、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板、試管,、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被,，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性,，據此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時,，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間,。吸附溫度，小鼠ELISA試劑盒時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時,。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1,、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時,，觀察陽性標本的OD值,。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml,。
（3） 酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）,。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物,、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
（4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉,、安全,、有明顯地顯色反應，而本身無色,。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用,，應注意防護。有條件者應使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,，應加入強酸或強堿以終止反應,。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜,。小鼠ELISA試劑盒底物使用液必須新鮮配制,，尤其是H2O2在臨用前加入。