【豬透明質(zhì)酸(HA) elisa試劑盒】本試劑僅供研究使用

計(jì)算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度,。

【豬透明質(zhì)酸(HA) elisa試劑盒】試劑盒組成：

封板膜:2片（48）/2片（96）

說明書:1份

密封袋:1個(gè)

標(biāo)準(zhǔn)品：   2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶  2-8℃保存

酶標(biāo)包被板:  1×48     1×96         2-8℃保存

樣品稀釋液: 3ml×1瓶  6 ml×1瓶     2-8℃保存

顯色劑A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存

顯色劑B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存

終止液:     3ml×1瓶 6ml×1瓶     2-8℃保存

濃縮洗滌液:（20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶   2-8℃保存

實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬透明質(zhì)酸(HA) 水平。用純化的豬透明質(zhì)酸(HA) 抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入豬透明質(zhì)酸(HA) ，再與HRP標(biāo)記的豬透明質(zhì)酸(HA) 抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的,。顏色的深淺和樣品中的豬透明質(zhì)酸(HA) 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中豬透明質(zhì)酸(HA) 濃度,。

目的：本試劑盒用于測定豬血清，血漿及相關(guān)液體樣本中豬透明質(zhì)酸(HA) 的含量,。

服務(wù)承諾：

供貨期：款到發(fā)貨,。
工作時(shí)間內(nèi)免費(fèi)的技術(shù)咨詢和指導(dǎo) 。請
為客戶提供來樣檢測服務(wù),，zui大限度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性(免費(fèi)代測),。

保存條件及有效期：

試劑盒保存：2-8℃| 有效期：6個(gè)月

【豬透明質(zhì)酸(HA) elisa試劑盒】樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心,。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心,。

3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實(shí)行,。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

【豬透明質(zhì)酸(HA) elisa試劑盒】操作步驟：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為1800ng/L,，1200ng/L ，600ng/L,，300ng/L,， 150ng/L）。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3,。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）,。