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小鼠ELISA試劑盒操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,,不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A、B液時,,避免使用帶金屬部分的加樣器,。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
洗滌酶標板時應充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發(fā),,避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值,。
加入試劑的順序應一致,,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。
樣品收集,、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,,取上清液
保存------如果樣品不立即使用,,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
小鼠ELISA試劑盒試劑的準備
標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,,不能儲存,。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
800 ng/ml
(6號標準品)
原倍濃度不用稀釋直接加入50ul,。
400 ng/ml
(5號標準品)
100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 ng/ml
(4號標準品)
100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 ng/ml
(3號標準品)
100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 ng/ml
(2號標準品)
100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 ng/ml
(1號標準品)
100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ng/ml
(空白對照)
原始濃度不用稀釋直接加入50ul,。
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