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小鼠ELISA試劑盒抗原C(HLA-C)酶聯(lián)免疫分析說明書

時間:2013/9/17閱讀:928
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小鼠ELISA試劑盒品名稱:
通用名:人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
  本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)含量。
實驗原理
  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)水平,。用純化的人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C),再與HRP標(biāo)記的HLA-C抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的,。顏色的深淺和樣品中的人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)濃度,。
小鼠ELISA試劑盒標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
小鼠ELISA試劑盒操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在*,、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻,;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,,再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,,再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,,混勻;混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,,濃度分別為120μg/L,80μg/L ,,40μg/L,,20μg/L, 10μg/L),。
加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混

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