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實驗動物各種體液、骨髓的采集方法

時間:2010/3/31閱讀:3237
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一、消化液的采集
(一) 唾液
1. 直接抽取法 在急性實驗中,, 可用吸管直接插入動物口腔或唾液腺導(dǎo)管抽吸唾液,,此法非常簡單,但從口腔抽吸唾液會有雜質(zhì)混入,。
2. 制造腮腺瘺法 在慢性實驗中,收集狗的唾液,,要用外科手術(shù)方法將腮腺導(dǎo)管開口移向體外,即以腮腺導(dǎo)管為中心,,切成一直徑約2~3cm的圓形粘膜片,將此粘膜片,,與周圍組織分開,,穿過皮膚切口引到頰外,將帶有導(dǎo)管開口的粘膜片與周圍的皮膚縫合,腮腺分泌的唾液就流出頰外。這種方法可以收集到較純凈的唾液,。
(二)胃液 
1. 直接收集胃液法 急性實驗時,,先將動物麻醉,將插胃管經(jīng)口插入胃內(nèi),在灌胃管的出口連一注射器,,用此注射器可收集到胃液,此法適用于狗等大型動物,。如是大鼠,需手術(shù)剖腹,從幽門端向胃內(nèi)插入一塑料管,,再由口腔經(jīng)食道將一塑料管插入前胃,,用pH7.5、35℃左右的生理鹽水,,以12ml/h的流速灌胃,,收集流出液,進(jìn)行分析,。
2. 制備胃瘺法 在慢性實驗中,收集胃液多用胃瘺法,如全胃瘺法,、巴氏小胃瘺法、海氏小胃瘺法等,。制備小胃是將動物的胃分離出一小部分,,縫合起來形成小胃,主胃與小胃互不相通,,主胃進(jìn)行正常消化,,從小胃可收集到純凈的胃液。應(yīng)用該法,,可以待動物恢復(fù)健康后,,在動物清醒狀態(tài)下反復(fù)采集胃液。
(三)胰液和膽汁
在動物實驗中,,主要是通過對胰總管和膽總管的插管而獲得胰液或膽汁,。狗的胰總管開口于十二指腸降部,在緊靠腸壁處切開胰管,結(jié)扎固定并與導(dǎo)管相連,,即可見無色的胰液流入導(dǎo)管,。大鼠的胰管與膽管匯集于一個總管,在其入腸處插管固定,,并在近肝門處結(jié)扎和另行插管,,可分別收集到胰液和膽汁。
有時也可通過制備胰瘺和膽囊瘺來獲得胰液和膽汁,。 

二,、腦脊液的采集
(一)狗、兔腦脊液的采集通常采取脊髓穿刺法:穿刺部位在兩髂連線中點稍下方第七腰椎間隙,。動物輕度麻醉后,,側(cè)臥位固定,使頭部及尾部向腰部盡量彎曲,,剪去第七腰椎周圍的被毛,。消毒后操作者在動物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮膚,,右手持腰穿刺針垂直刺入,,當(dāng)有落空感及動物的后肢跳動時,表明針已達(dá)椎管內(nèi)( 蛛網(wǎng)膜下腔),,抽去針芯,即見腦脊液流出,。如果無腦脊液流出,可能是沒有刺破蛛網(wǎng)膜,。輕輕調(diào)節(jié)進(jìn)針方向及角度,,如果腦脊液流的太快,插入針芯稍加阻塞,,以免導(dǎo)致顱內(nèi)壓突然下降而形成腦疝,。 
(二)大鼠腦脊液的采集可采用枕大孔直接穿刺法 
在大鼠麻醉后,頭部固定于定向儀上,。頭頸部剪毛,、消毒,用手術(shù)刀沿縱軸切一縱行切口(約2cm)用剪刀鈍性分離頸部背側(cè)肌肉,。為避免出血,,zui深層附著在骨上的肌肉用手術(shù)刀背刮開,暴露出枕骨大孔,。由枕骨大孔進(jìn)針直接抽取腦脊液,。抽取完畢逢好外層肌肉、皮膚,。刀口處可撒些磺胺藥粉,,防止感染,。采完腦脊液后,應(yīng)注入等量的消毒生理鹽水,,以保持原來腦脊髓腔的壓力,。

三、骨髓的采集
1. 大鼠,、小鼠骨髓的采集:用頸椎脫臼法處死動物,剝離出胸骨或股骨,,用注射器吸取少量的Hank平衡鹽溶液,沖洗出胸骨或股骨中全部骨髓液,。如果是取少量的骨髓作檢查,,可將胸骨或股骨剪斷,將其斷面的骨髓擠在有稀釋液的玻片上,,混勻后涂片涼干即可染色檢查,。
2. 大動物骨髓的采集:狗等大動物骨髓的采集可采取活體穿刺方法。 先將動物麻醉,、固定、局部除毛,、消毒皮膚,,然后估計好皮膚到骨髓的距離,把骨髓穿刺針的長度固定好,。操作人員用左手把穿刺點周圍的皮膚繃緊,,右手將穿刺針在穿刺點垂直刺入,穿入固定后,,輕輕左右旋轉(zhuǎn)將穿刺針鉆入,,當(dāng)穿刺針進(jìn)入骨髓腔時常有落空感。狗骨髓的采集,,一般采用髂骨穿刺,。
狗等大動物常用的骨髓穿刺點:胸骨:穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處。肋骨:穿刺部位是第5~7肋骨各點的中點,。脛骨:穿刺部位是股骨內(nèi)側(cè),、靠下端的凹面處。如果穿刺采用的是肋骨,,穿刺結(jié)束后要用膠布封貼穿刺孔,,防止發(fā)生氣胸。 

四,、腹水的采集
抽取狗等大動物腹水,,讓狗按自然站立位固定,穿刺部位在恥骨前緣與臍之間,,腹中線兩側(cè),。剪毛消毒,,局部浸潤麻醉。操作者左手姆,、食指緊繃穿刺部位的皮膚,,右手控制穿刺深度做垂直穿刺。注意不可刺的太深,,以免刺傷內(nèi)臟,。穿刺針進(jìn)入腹腔后,腹水多時可見因腹壓高而自動流出,。腹水太少可輕輕回抽,,并同時稍稍轉(zhuǎn)動一下針頭,一旦有腹水流出,,立即固定好針頭及注射器的位置連續(xù)抽取,。
抽取大鼠、小鼠的腹水方法簡單,,用左手拇指及食指捏住動物頸部皮膚,,無名指、小手指及手掌夾住其尾巴固定好動物,,使其腹部略朝上,,在腹股溝和腹中線之間,消毒皮膚,用8號針頭刺入腹腔,如腹壓高腹水自然流出,,如腹水太少,,可借助注射器抽取。
抽腹水時注意不可速度太快,,腹水多時不要一次大量抽出,,以免因腹壓突然下降導(dǎo)致動物出現(xiàn)循環(huán)功能障礙等問題。五,、尿液的采集
常用的采集方法較多,,一般在實驗前需給動物灌服一定量的水。
(一)代謝籠法:此法較常用,,適用于大,、小鼠。將動物放在特制的籠內(nèi),。動物排便時,,可以通過籠子底部的大小便分離漏斗將尿液與糞便分開,達(dá)到采集尿液的目的,。
由于大,、小鼠尿量較少,操作中的損失和蒸發(fā),,各鼠膀胱排空不一致等原因,,都可造成較大的誤差,,因此一般需收集5小時以上的尿液,zui后取平均值,。 
(二)導(dǎo)尿法:常用于雄性兔,、狗。動物輕度麻醉后,,固定于手術(shù)臺上,。由尿道插入導(dǎo)尿管(頂端應(yīng)用液體石蠟涂抹),可以采到?jīng)]有受到污染的尿液,。
(三)壓迫膀胱法:在實驗研究中,,有時為了某種實驗?zāi)康模箝g隔一定的時間,,收集一次尿液,,以觀察藥物的排泄情況。動物輕度麻醉后,,實驗人員用手在動物下腹部加壓,,手要輕柔而有力。當(dāng)加的壓力足以使動物膀胱括約肌松馳時,,尿液會自動由尿道排出,。此法適用于兔、狗等較大動物,。
(四)輸尿管插管法:動物麻醉后,固定于手術(shù)臺上,。剪毛,、消毒,于恥骨聯(lián)合上緣之上在正中線做皮膚切口(長約3~4cm),沿腹中線切開腹壁及腹膜,找到膀胱翻出腹外,。辨認(rèn)清楚輸尿管進(jìn)入膀胱背側(cè)的部位(膀胱三角)后,,細(xì)心地分離出兩側(cè)輸尿管,分別在靠近膀胱處穿線結(jié)扎,。在離此結(jié)扎點約2cm 處的輸尿管近腎段下方穿一根絲線,。用眼科剪在管壁上剪一斜向腎側(cè)的小切口,分別插入充滿生理鹽水的細(xì)塑料管( 插入端剪成斜面),,用留置的線結(jié)扎固定,。可見到尿滴從插管中流出( 頭幾滴是生理鹽水),,塑料管的另一端與帶刻度的容器相連或接在記滴器上,, 以便記錄尿量。 在適用過程中應(yīng)經(jīng)?;顒右幌螺斈蚬懿骞?,以防阻塞,。在切口和膀胱處應(yīng)蓋上溫濕的生理鹽水紗布。
(五)膀胱插管法:腹部手術(shù)同輸尿管插管,。將膀胱翻出腹外后,,用絲線結(jié)扎膀胱頸部,阻斷它同尿道的通路,。然后在膀胱頂部避開血管剪一小口,,插入膀胱漏斗,用絲線做以荷包縫合固定,。漏斗正對著輸尿管的入口處,。注意不要緊貼膀胱后壁而堵塞輸尿管。下端接橡皮管插入帶刻度的容器內(nèi)以收集尿液,。
(六)穿刺膀胱法:動物麻醉后固定于手術(shù)臺上,,在恥骨聯(lián)合之上腹正中線剪毛,消毒后進(jìn)行穿刺,,入皮后針頭應(yīng)稍改變一下角度,,以避免穿刺后漏尿。
(七)剖腹采尿法:同穿刺法做術(shù)前準(zhǔn)備,,皮膚準(zhǔn)備范圍應(yīng)大一點,。剖腹暴露膀胱,操作者的左手用無齒小平鑷夾住一小部分膀胱,,右手持針在小鑷夾住的膀胱部位直視穿刺抽取尿液,。可避免針頭貼在膀胱壁上而抽不出尿液,。
(八)反射排尿法:適用于小鼠,,因小鼠被人抓住尾巴提起時排便反射比較明顯。故需采取少量尿液時,,可提起小鼠,,將排出的尿液接到帶刻度的容器內(nèi)。 

六,、精液的采集
(一)人工陰道采集精液(semen):體型較大的動物,,如狗、豬,、羊等,可用一專門的人工陰道套在發(fā)情的雄性動物陰莖上,,采集精液。也可將人工陰道置入雌性動物的陰道內(nèi),,待動物交配完畢后,,取出人工陰道采集精液。還可將人工陰道固定在雌性動物外生殖器附近,,雄性動物陰莖開始插入時,立即將其陰莖移入人工陰道內(nèi),,待其射精完畢后,采集人工陰道內(nèi)的精液,。
(二)陰道栓采集精液:大小鼠雌雄交配后,24小時內(nèi)可在雌性動物陰道口出現(xiàn)白色透明的陰道栓,,這是雄鼠的精液和雌鼠陰道分泌液在陰道內(nèi)凝固而成的,,取陰道栓涂片染色可觀察到凝固的精液。
(三)其它采集精液法:將發(fā)情的雌性動物放在雄性動物一起,,當(dāng)雄性動物被刺激發(fā)情后,,立即將雄性動物分開,再用人工法刺激其射精,。也可按摩雄性動物的生殖器或用電刺激其發(fā)情中樞或性敏感區(qū),,使其射精。 

七,、陰道內(nèi)液體的采集
(一)棉拭子法:用消毒棉拭子旋轉(zhuǎn)插入動物陰道內(nèi),,然后在陰道內(nèi)輕輕轉(zhuǎn)動幾下后取出,即可進(jìn)行涂片鏡檢,。有的適用如大,、小鼠等,陰道液較少,,取其陰道液時,,可用先浸濕后又?jǐn)D盡無菌生理鹽水的棉拭子取陰道液,這種棉拭子比干棉拭子容易插入陰道。對體型較大的實驗動物,,也可先按摩或刺激其陰部,,而后再采集其陰道液。
(二)滴管法:用消毒的鈍頭滴管吸取少量的無菌生理鹽水插入動物陰道內(nèi),,然后擠出生理鹽水后又吸入,,反復(fù)幾次,吸取陰道沖洗液滴于玻片上制片,、染色鏡檢。
(三)刮取法:用光滑的玻璃小勺或牛角制的小刮片慢慢插入陰道內(nèi),,在陰道壁輕輕刮取一點陰道內(nèi)含物,,進(jìn)行涂片鏡檢。 

八,、胸水的采集
收集胸水常采用穿刺法,。如果實驗不要求動物繼續(xù)存活,也可用處死動物剖胸取胸水,。穿刺部位在動物脊側(cè)腋后線胸壁第11~12肋間隙穿刺較安全,。此部位是肺zui下界之外側(cè),既可避免損傷肺組織造成氣胸,,又易采集在隔肋竇的胸水,。此外,,也可在腹側(cè)胸壁近胸骨左側(cè)緣第4~5肋間隙穿刺。
動物穿刺部位剪毛,、消毒,,操作者左手拇、食指繃緊肋間穿刺部位的皮膚,,用帶夾的橡皮管套上12~14號針頭,,沿肋骨前緣小心地垂直刺入,。當(dāng)有阻力消失或落空感時,,表示已穿入胸腔。再接上針管,,除去夾子,,緩緩抽取胸水。如果有條件在穿刺針頭與注射器之間連一個三通管,,但應(yīng)注意正確運用三通管,。穿刺結(jié)束迅速拔出針頭,輕揉穿刺部位,,促進(jìn)針孔閉合并注意消毒,。
操作中嚴(yán)防空氣進(jìn)入胸腔,始終保持胸腔負(fù)壓,。穿刺應(yīng)用手控制針頭的深度,,以防穿刺過深刺傷肺臟。

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