ELISA試劑盒的技術(shù)要點(diǎn)包括三個(gè)方面：試劑的制備,、反應(yīng)條件的選擇和操作的標(biāo)準(zhǔn)化。一,、試劑的制備ELISA的主要試劑為固相的抗原或抗體,、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。以下敘述這些試劑的原料和制備方法,。
         （一）固相載體可作 ELISA試劑盒中載體的物質(zhì)很多,，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來(lái)的免疫活性,。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式,。
         （二）抗原和抗體在 ELISA試劑盒實(shí)施過(guò)程中,，抗原和抗體的質(zhì)量是實(shí)驗(yàn)是否成功的關(guān)鍵因素。本法要求所用抗原純度高,，抗體效價(jià)高,、親和力強(qiáng)。 ELISA試劑盒 所用抗原有三個(gè)來(lái)源：天然抗原,、重組抗原和合成多肽抗原,。天然抗原取材于動(dòng)物組織或體液、微生物培養(yǎng)物等,，一般含有多種抗原成分,，需經(jīng)純化,，提取出特定的抗原成分后才可應(yīng)用，因此也稱提純抗原（purifiedantigen）,。重組抗原（recombinantantigen）和多肽抗原（peptideantigen）均為人工合成品,，使用安全，而且純度高,，干擾物質(zhì)少,。
        （三）免疫吸附劑固相的抗原或抗體稱為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過(guò)程稱為包被（coating）,。由于載體的不同,，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板為載體,，通常將抗原或抗體溶于緩沖液（zui常用的為pH9.6的碳酸緩沖液）中,，加于ELISA板孔中在4℃，經(jīng)清洗后即可應(yīng)用,。如果包被液中的蛋白質(zhì)濃度過(guò)低,，ELISA試劑盒固相載體表面有能被此蛋白質(zhì)*覆蓋，其后加入的血清標(biāo)本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會(huì)部分地吸附于固相載體表面,，zui后產(chǎn)生非特異性顯色而導(dǎo)致本底偏高,。