本試劑僅供研究使用 標(biāo)本：血清或血漿

人表面活性蛋白DELISA 檢測(cè)試劑盒
試驗(yàn)原理：
　　　　SP-D試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知SP-D濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),。先將SP-D和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育,。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A,、B,，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中SP-D的濃度呈比例關(guān)系,。
　　　　　　　　　　　　
自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul,、10ul,、50ul、100ul,、200ul,、500ul、1000ul,。
振蕩器及磁力攪拌器等,。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,，請(qǐng)盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人表面活性蛋白DELISA 檢測(cè)試劑盒
操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存,。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì),。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時(shí),，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子,。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

人表面活性蛋白DELISA 檢測(cè)試劑盒
試劑的準(zhǔn)備
標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存,。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻,。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí),。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。
甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
取出酶標(biāo)板,，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果,。
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果,。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）,，相應(yīng)的SP-D標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線,，樣品的SP-D含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,。

3、檢測(cè)值范圍：0-40ug/ml

4,、敏感度： 0.1 ug/ml
 

人表面活性蛋白DELISA 檢測(cè)試劑盒
RC007-5ug Recombinant Human Interleukin -6 （rHu IL-6） 重組人白細(xì)胞介素-6 5ug
RC008-5ug Recombinant Human Interleukin -8 （72a.a.）（rHu IL-8 72a.a.） 重組人白細(xì)胞介素-8（72a.a.） 5ug
RC009-5ug Recombinant Human Interleukin -8 （77a.a.）（rHu IL-8 77a.a.） 重組人白細(xì)胞介素-8（77a.a.） 5ug
RC010-2ug Recombinant Human Interleukin -10 （rHu IL-10） 重組人白細(xì)胞介素-10 2ug
RC011-2ug Recombinant Human Interleukin -11 （rHu IL-11） 重組人白細(xì)胞介素-11 2ug
RC011-10ug Recombinant Human Interleukin -11 （rHu IL-11） 重組人白細(xì)胞介素-11 10ug
RC012-2ug Recombinant Human Interleukin -13 （rHu IL-13） 重組人白細(xì)胞介素-13 2ug
RC013-2ug Recombinant Human Interleukin -15 （rHu IL-15） 重組人白細(xì)胞介素-15 2ug
RC014-5ug Recombinant Human Interleukin -17 （rHu IL-17） 重組人白細(xì)胞介素-17 5ug