人一氧化氮ELISA 檢測試劑盒　　　　　　　　　　

本試劑僅供研究使用      標本：細胞上清液

試驗原理：
　　　　NO試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知NO濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測,。先將NO和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后，加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A,、B,，和酶結合物同時作用。產生顏色,。顏色的深淺和樣品中NO的濃度呈比例關系,。

自備材料
蒸餾水,。
加樣器：5ul,、10ul,、50ul、100ul,、200ul,、500ul、1000ul,。
振蕩器及磁力攪拌器等,。

人一氧化氮ELISA 檢測試劑盒

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存,。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質,。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質前使用,。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
洗滌酶標板時應充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。

人一氧化氮ELISA 檢測試劑盒

樣品收集,、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液
保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。

人一氧化氮ELISA 檢測試劑盒

操作步驟
使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔,。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內,。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內,。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。
甩去孔內液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。
甩去孔內液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應立即測定結果,。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

局
6號標準品以上的結果為非線性的,，根據(jù)此標準曲線無法得到的結果,。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內,、板間變異系數(shù)均小于10%,。

結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y）,，相應的NO標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線，樣品的NO含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,。

3,、檢測值范圍：0-80umol/L

4、敏感度： 0.1 umol/L

IFN-γR/CD119（Interferon-γR receptor） 干擾素-γ受體抗體
nti-IGC （immunoglobulin delta heavy chain constant A region membrane-bound form） 兔抗非洲爪蟾IGC抗體
IGF-1R/CD221 （Insulin-like Growth Factor-I Receptor） 胰島素樣生長因子-I受體抗體
Goat anti-rat IgM/RBITC 羅丹明標記羊抗大鼠IgM
Goat anti-Guinea IgG/RBITC 羅丹明標記羊抗豚鼠IgG
Mouse anti-goat IgG/RBITC 羅丹明標記小鼠抗羊IgG
Mouse anti-goat IgM/RBITC 羅丹明標記小鼠抗羊IgM
IGF-1R/CD221 （Insulin-like Growth Factor-I Receptor） 胰島素樣生長因子-I受體抗體
IGFBP-1（Insulin-like Growth Factor Binding Protein 1） 胰島素樣生長因子結合蛋白-1抗體
IGFBP-2 （Insulin-like Growth Factor Binding Protein 2） 胰島素樣生長因子結合蛋白-2抗體
IGFBP-3 （Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3） 胰島素樣生長因子結合蛋白-3抗體
IGFBP-3 （Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3） 胰島素樣生長因子結合蛋白-4抗體