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小鼠β-肌動蛋白(β-Actin)ELISA試劑盒江西,,上饒
本試劑僅供研究使用 標本:血清或血漿
小鼠β-肌動蛋白(β-Actin)ELISA試劑盒江西,,上饒
試驗原理:
β-Actin試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知β-Actin濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將β-Actin和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后,加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A,、B,和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中β-Actin的濃度呈比例關(guān)系。
小鼠β-肌動蛋白(β-Actin)ELISA試劑盒江西,,上饒
試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制
96/48人份酶標板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型
塑料膜板蓋1塊半塊即用型
標準品:240nmol/L1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進行稀稀
空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型
標準品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型
生物素標記的抗β-Actin抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型
親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型
洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進行稀釋
底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
自備材料
1.蒸餾水,。
2.加樣器:5ul,、10ul、50ul,、100ul,、200、500ul,、1000ul,。
3.振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1.避免直接接觸終止液和底物A,、B,。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗,。
2.實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品。
3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。
操作注意事項
1.試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,,不可保存,。
2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,,以免變質(zhì),。
3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A,、B液時,,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6.洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水,。
7.底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
8.加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9.按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作,。
樣品收集、處理及保存方法
1,、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2、血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3,、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4,、保存------如果樣品不立即使用,,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備
1.標準品:標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備,,不能儲存,。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
240 nmol/L(6號標準品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul,。
120 nmol/L(5號標準品)100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
60 nmol/L(4號標準品)100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
30 nmol/L(3號標準品)100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
15 nmol/L(2號標準品)100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
7.5 nmol/L(1號標準品)100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 nmol/L(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul,。
2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
1.使用前,,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時。
4.甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘,。
6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
7.每孔加入底物A,、B各50ul,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8.取出酶標板,,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9.在450nm波長處測定各孔的OD值,。
建議使用的實驗方案
標準品濃度(nmol/L)
A240240樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
B120120樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
C6060樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
D3030樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
E1515樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
F7.57.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,,根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果,。
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2,、以吸光度OD值為縱坐標(Y),,相應(yīng)的β-Actin標準品濃度為橫坐標(X),做得相應(yīng)的曲線,,樣品的β-Actin含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度,。
3、檢測值范圍:0-240nmol/L
4,、敏感度: 0.1 nmol/L
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