ATCC細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔,，空氣清新，干燥和無煙塵,。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè),，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于室，而洗刷消毒在另室,。

常用設(shè)施及設(shè)備

1.超凈工作臺：也稱凈化工作臺,，分為側(cè)流式,，直流式和外流式三大類。

2.無菌操作間：般由更衣間,，緩沖間和操作間三部分組成,。操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱，離心機(jī),，倒置顯微鏡等,。緩沖間可放置電冰箱，冷藏器及消毒好的無菌物品等,。

3.操作間：普通培養(yǎng)箱,，離心機(jī)，水浴鍋,，定時(shí)鐘,，普通天平及日常分析處理物。

4.洗刷消毒間：烤箱,，消毒鍋,，蒸餾水處理器及酸缸等。

5.分析間：顯微鏡,，計(jì)算機(jī)及打印機(jī)等,。

培養(yǎng)器皿

用細(xì)胞培養(yǎng)器皿有培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)板,，培養(yǎng)皿等,。

常準(zhǔn)備量是使用量的三倍，器皿應(yīng)選擇透明度好,，無毒,，利于細(xì)胞粘附和生長的材料，常用次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品,。

常用的器皿有下面幾種：

1.液體儲存瓶：用于儲存各種配制好的培養(yǎng)液,，血清等液體，常用規(guī)格有500ml,，250ml,，100ml等幾種。

2.培養(yǎng)瓶：根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異,，用于細(xì)胞傳代培養(yǎng)的細(xì)胞要求瓶壁厚簿均勻,，便于細(xì)胞貼壁生長和觀察，瓶口要大小致,，口徑般不小于1cm,，允許吸管伸入瓶內(nèi)任何部位，規(guī)格有200ml,100ml,50ml,25ml,10ml等幾種,。

3.培養(yǎng)皿：用于開放式培養(yǎng)及其它用途,。分直徑30mm,，60mm，120mm等幾種,。

4.吸管：常用的有長吸管和短吸管兩類,，長吸管也稱刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度稱改良吸管,，刻度吸管用于移動(dòng)液體,，常用1ml和10ml兩種。短吸管也叫滴管,，分彎頭和直頭兩種,。

5.離心管：離心管是細(xì)胞培養(yǎng)中使用廣泛的器皿，根據(jù)用途不同形態(tài)各樣,，常用于細(xì)胞培養(yǎng)的離心管有大腹式尖底離心管和普通尖底離心管兩類,。者分別為50ml，30ml,，15ml,；后者則多為10ml和5ml。

6.其它：如三角燒瓶,，燒杯,，量筒，漏斗,，注射器等,。

ATCC細(xì)胞培養(yǎng)溫度

維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長，必須有恒定而適宜的溫度,。不同種類的細(xì)胞對培養(yǎng)溫度要求也不同,，人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這溫度范圍,，細(xì)胞的正常代謝會受到影響,，甚至死亡。

培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐受力較對高溫強(qiáng),，溫度上升不超過39℃時(shí),，細(xì)胞代謝與溫度成正比；人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí),，即能受到定損傷,，但仍有可能恢復(fù)；在40-41℃1小時(shí),，細(xì)胞會普遍受到損傷,，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；41-42℃1小時(shí),，細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷,，大部分細(xì)胞死亡，個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能,；當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí),，細(xì)胞全部死亡。相反,，溫度不低于0℃時(shí),，對細(xì)胞代謝雖有影響，但并無傷害作用,；把細(xì)胞放入25-35℃時(shí),，細(xì)胞仍能生存和生長，但速度減慢,；放在4℃數(shù)小時(shí)后,，再回到37℃培養(yǎng)，細(xì)胞仍能繼續(xù)生長,。細(xì)胞代謝隨溫度降低而減慢,，當(dāng)溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí)，細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡,。但是,，如果向培養(yǎng)液中加入定量的冷凍保護(hù)劑（二甲亞砜或甘油），可在深低溫下如-80℃或-196℃（液氮）長期保存,。

合適的氣體環(huán)境

氣體是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之,，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán),，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的各種成分,。開放培養(yǎng)時(shí)般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中，二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物,，也是細(xì)胞生長繁殖所需成分,，它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的pH值。大多數(shù)細(xì)胞的適宜pH為7.2-7.4,，偏離這范圍對細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響,。但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大些，在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長,。但有些細(xì)胞也喜歡偏堿環(huán)境中生長,，如成纖維細(xì)胞適合pH是7.4-7.6.每種細(xì)胞都有其適pH值。

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