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實(shí)驗(yàn)時(shí),，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制實(shí)驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份,，以確保實(shí)驗(yàn)作用的準(zhǔn)確性,。有時(shí)本底較高，闡明有非特異性反應(yīng),，可選用羊血清,、兔血清或BSA等封閉。

 上海研域生物在ELISA試劑盒當(dāng)中,，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其間包含：

1. 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體,，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其方法可所以凹孔平板,、試管、珠粒等?，F(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體，在運(yùn)用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被,，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),，調(diào)查其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附功能是否良好,。

2. 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體外表時(shí),，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度,，時(shí)間及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃18～24小時(shí),。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進(jìn)行包被后,，在其它實(shí)驗(yàn)條件相一同,，調(diào)查陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度,。關(guān)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)一般為1～10μg／ml,。

3. 酶符號(hào)抗體作業(yè)濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行開(kāi)始效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶符號(hào)抗體部份)。然后再固定其它條件或采納“方陣法"(包被物,、待檢樣品的參閱品及酶符號(hào)抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其作業(yè)濃度,。 

4. 酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),，而本身無(wú)色,。有些供氫體有潛在的致癌作用，應(yīng)留意防護(hù),。有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌,、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿(mǎn)意的供氫體,。ELISA試劑盒底物作用一段時(shí)間后,，應(yīng)參與強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以停止反應(yīng)。一般底物作用時(shí)間,，以10-30分鐘為宜,。底物運(yùn)用液有必要新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前參與,。 

上海研域生物開(kāi)工大喜,，六六六，順風(fēng)順?biāo)白?；開(kāi)門(mén)大吉,，八八八，恒發(fā)隆發(fā)發(fā)發(fā)發(fā),；開(kāi)門(mén)大樂(lè),，九九九，好運(yùn)財(cái)運(yùn)到,。祝你生意興?。?/span>