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多克隆抗體技術(shù)之抗體鑒定

時間:2011/12/8閱讀:2017
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多克隆抗體技術(shù)之抗體鑒定
(一)抗體的鑒定
1,、抗體的效價鑒定 不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較價,。不同的抗原制備的抗體,,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,,包括有試管凝集反應(yīng),、瓊脂擴散試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗等,。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,,以資比較。如制備抗抗體的效價,,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。
2,、抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力,。抗體的特異性高,,它的識別能力就強,。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗測定,。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,,計算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時的濃度,并按下列公式計算交叉反應(yīng)率,。
交叉反應(yīng)率=IC50時抗原濃度(Y)/ IC50近似抗原物質(zhì)的濃度(Z)X 100%
如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,,即該血清的特異性較好,。
3、抗體的親和力 抗體的親和力是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度,。親和力的高低是由抗原分子的大小,、抗體分子的結(jié)合位點與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵,、疏水鍵,、側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力、范德華力和空間斥力,。親和力常以親和常數(shù)K表示,,K的單位是L/mol,通常K的范圍在108~1010/mol,,也有多達1014/mol,。抗體親和力的測定對抗體的篩選,,確定抗體的用途,,驗證抗體的均一性等均有重要意義。
(二)抗血清的凍存
抗血清收獲后,,加1/萬硫柳汞或1/萬的疊氮鈉防腐,,或加入等量的中性甘油,分裝小瓶,,置-20℃以下的低溫保存,,數(shù)月至數(shù)年內(nèi)抗體效價無明顯變化。注意避免反復(fù)凍融,。也可將抗血清冷凍干燥后保存,。
多克隆抗體技術(shù)之抗體鑒定
 

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