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ELISA實(shí)驗(yàn)是一種敏感性高,,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法,。由于其試劑穩(wěn)定,、易保存,操作簡(jiǎn)便,,結(jié)果判斷較客觀等因索,,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各域中。ELISA試劑盒應(yīng)該如何保存,?保存不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致試劑失效或影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,!
1,、要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅索基團(tuán),,其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性,,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中,,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,,則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色,。
2,、樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長(zhǎng),,其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾,。
3、血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離,,則可以在2~8下保存一周,,如為有菌操作,則建議冰凍保存,。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,,應(yīng)在-70℃以下。
4,、冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融,。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果,。此外,,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,,反復(fù)顛倒混勻即可,。
5、ELISA試劑盒的標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè),。
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