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ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。除了盒子本身質(zhì)量外,操作中很多因素都影響試驗的正常結(jié)果,。*常出現(xiàn)的問題是顯色淡,靈敏度偏低,、重復(fù)性不佳,、假陽性結(jié)果和假陰性結(jié)果,,不管出現(xiàn)什么樣的結(jié)果,,不但浪費(fèi)客戶的金錢、樣本,、精力,,更重要的是對臨床做出了危險判斷。在這里我們分析ELISA試驗非正常檢測結(jié)果產(chǎn)生的常見原因,,并探討其解決辦法,,以提高檢測質(zhì)量。
1. 標(biāo)本的采集與保存
當(dāng)標(biāo)本采集保存不當(dāng)產(chǎn)生溶血時,,紅細(xì)胞中的血紅蛋白釋放到血清中,,血紅蛋白具有過氧化物酶的性質(zhì),其通過吸附或“PP效應(yīng)"
(蛋白質(zhì)間相互吸附的現(xiàn)象)結(jié)合后,,可催化,、B液顯色而造成假陽性標(biāo)本采集保存不當(dāng)致細(xì)菌污染,,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,會產(chǎn)生假陽性反應(yīng);標(biāo)本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG聚合,,易使間接法的試驗本底加深,。因此,標(biāo)本宜在新鮮時檢測,。
反復(fù)凍融血清會使抗體效價跌落,,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存做多次檢測,宜少里分裝凍存,。
2.加樣
如果ELISA試驗樣品稀釋液少加或血清多加,,都會引起本底增高。對于間接法來說,,受上述兩個因索影響更大,。因為血清中受檢的特異性IgG只占IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強(qiáng),,非特異性IgG可直接吸附到固相載體上,,有時也可吸附到包被抗原的夫面。這些非特異性的IgG均可以和酶標(biāo)二抗發(fā)生反應(yīng)而造成較高陰性本底或假陽性,。如果加入的血清過多,,高于規(guī)定的稀釋倍數(shù),極易造成高值陰性,。反之,,造成假陰性。
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