ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高,、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意,，有可能導(dǎo)致顯色不全,、花板等結(jié)果。上海研域生物將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)一下,，以期給同行帶來—些啟發(fā),，提高試驗質(zhì)量。

1,、超過有效期,。試劑盒必須在有效期內(nèi)使用,，超過有效期的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號。

2,、試劑盒沒有按規(guī)定進行保存,，受高溫影響。

3,、試劑,、樣品用前未平衡至室溫

4、加入試劑的體積和時間有誤,，移液器計量不準,，吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔。

5,、洗板及加樣過程中,，酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力，

6,、孵育時間及孵育溫度未達到要求,，反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時注意溫度并及時調(diào)整。

7,、洗板次數(shù)過多,，或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求，洗滌沖擊力太大,，浸泡時間太長等,，

8、顯色劑加量不足或順序顛倒,，或混合后加入,。

9、底物作用時間不夠,，

10,、燕餾水水質(zhì)有問題

ELISA試劑盒靈敏度出現(xiàn)問題相應(yīng)的解決方法

1、實驗前檢查試劑的組分及批號,，確認試劑未過期,

2,、不要將試劑盒長時間置于常溫下，按便用規(guī)定儲藏,。

3,、試劑、樣品用前平衡至室溫

4,、確定所使用的試劑體積正確,，加入時間適當(dāng),。校正移液器,，移液器與吸晚配合要緊密吻合,。移液不宣太快，盡量排放完,。

5,、確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如愛氮鈉等，確認配制洗液的容器已洗千凈,，確認配制洗液的純化水達到要求且未受污染,。

6、孵育溫度應(yīng)控制在37-38C,，孵育時間嚴格按照說明書操作,。保溫期內(nèi)不宜多開門，以免影響保溫,。

7,、嚴格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板，減小洗滌沖擊力,，按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數(shù),，

8、顯色劑滴瓶垂直向下,，持力均勻,，滴速不宜過快，先加顯色劑A,，后加顯色劑B,，不可將A、B液混合,。

9,、準確定時。

10,、測定燕餾水配制試劑對酶免疫法的影響,。