ELISA細節(jié)盤點

1. 樣本收集

每個標本量收集體積=100ulx檢測指標,，如要做復孔,，標本量收集體積=10Oul×檢測指標×2。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集標本,，將標本及時分裝后放在-20°℃或-70°℃條件下保存，避免反復凍融,。標本2-8℃可保存48小時,，-20°℃可保存1個月。-70度可保存6個月,。部分激素類標本需添加抑肽酶,。如需離心的樣本，離心轉(zhuǎn)速不宜過高(2000~3000)

2. ELISA加樣

加樣品時,，單孔用量要求: ≥50ul/指標,，如需要做2個復孔則血量≥100ul/指標。如果樣本量不充足,，具體用量可咨詢您的專屬銷售,。

3. 樣品捕獲抗體孵育

37C恒溫孵育，避免溫度變化過大

4. 洗滌

機洗: 將25x×洗滌緩沖液稀釋成1×,，1×洗滌緩沖液洗三次,，每次加300uL浸泡60s手洗:手洗次數(shù)應比機洗次數(shù)多，浸泡時間也應適當延長

手洗容易導致吸附在酶標板底部的試劑脫落,，從而導致結果偏小,，手洗次數(shù)過多也會影響實驗結果，建議機洗

5. 底物顯色（TMB顯色) 孵育

TMB在使用前應放置室溫平衡30分鐘,，加的量為A,、B各50uL

6. ELISA終止液終止反應

加完TMB終止液應讓其混勻再在酶標儀上讀數(shù)

7. 酶標儀讀數(shù)

在450nm波長處測定O.D值

8. 根據(jù)O.D值計算樣本濃度

使用軟件擬合標準曲線，根據(jù)標準曲線的擬合度(r或R2）以及殘差平方和（s）選擇合適的曲線,。

上海研域生物有限公司,，生命科學和生物醫(yī)學域十余年，是集研發(fā),、生產(chǎn),、銷售于一體的專業(yè)生物公司。公司目前可以提供多種生物學檢測試劑盒,、進口常規(guī)生化ELISA試劑,、抗體、標準品,、血清等產(chǎn)品,。如果您有實驗方面的需求和問題，都可以聯(lián)系我們,，歡迎咨詢,。