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流式細(xì)胞術(shù)在過去30年里得到迅速發(fā)展,,在免疫學(xué),、分子生物學(xué),、細(xì)菌學(xué)、病毒學(xué),、癌癥生物學(xué)和傳染病學(xué)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用,。比如,流式細(xì)胞術(shù)對研究免疫系統(tǒng)狀態(tài)及其對傳染病和癌癥的反應(yīng)非常重要,,它可以表征來自血液和骨髓的混合細(xì)胞群,,以及由淋巴結(jié)、脾,、粘膜組織,、實(shí)體腫瘤等固體組織分解成的單個(gè)細(xì)胞。除了分析細(xì)胞外,,流式細(xì)胞術(shù)另一個(gè)主要應(yīng)用是對細(xì)胞進(jìn)行分選,,以滿足使用者進(jìn)一步的分析需求。
本文將主要以細(xì)胞生物學(xué),、免疫學(xué)和分子生物學(xué)為例,,介紹流式細(xì)胞術(shù)在實(shí)際中的應(yīng)用。
細(xì)胞生物學(xué)與免疫學(xué)
免疫分型:
免疫分型在流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用中常見,,它利用流式細(xì)胞術(shù)的能力同時(shí)分析混合細(xì)胞群的多個(gè)參數(shù),。免疫分型基本的形式就是使熒光偶聯(lián)抗體與細(xì)胞表面對應(yīng)的抗原特異性結(jié)合,之后利用流式細(xì)胞儀,,根據(jù)細(xì)胞表面的熒光對細(xì)胞做出分析,。大多數(shù)抗原都有特定的分化亞群編號或者CD編號,對應(yīng)的抗體用相同的方式命名,。
大多數(shù)免疫細(xì)胞都有特定的CD標(biāo)記,,這些細(xì)胞標(biāo)記稱為譜系標(biāo)記,用于定義特定細(xì)胞群,,以便在每個(gè)免疫分型實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行額外分析,。例如T細(xì)胞標(biāo)記物(CD3, CD4, CD8), B細(xì)胞標(biāo)記物(CD19, CD20),,單核細(xì)胞標(biāo)記物(CD14, CD11b)和NK細(xì)胞標(biāo)記物(CD56, CD161),。
除了定義細(xì)胞群的譜系標(biāo)記外,還使用其他標(biāo)記來描述每個(gè)細(xì)胞群的特征,。這些標(biāo)記包括激活標(biāo)記(CD69,、CD25、CD62L),、記憶標(biāo)記(CD45RO,、CD27)、組織歸巢標(biāo)記(α4/β7)和趨化因子受體標(biāo)記(CCR7,、CCR5,、CXCR4、CCR6)等,。通常,,免疫分型還針對細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記物,如FoxP3(定義Treg細(xì)胞),、細(xì)胞因子(IFN-γ,、TNF-α、IL-2定義Th1細(xì)胞),、增殖標(biāo)記物(Ki67,、CFSE)和抗原特異性標(biāo)記物等。
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